Técnicas de adn aplicadas al diagnóstico de infecciones

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Técnicas de ADN Aplicadas al Diagnóstico de Infecciones


IQUIQUE – CHILE
2008

1. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

1.1 Métodos para la detección de enfermedades infecciosas

El diagnóstico definitivo de enfermedades infecciosas provocadas por microorganismos en la actualidad puede establecerse mediante métodos delaboratorio, ya que generalmente las manifestaciones clínicas no son lo suficientemente específicas (Beelaert et al., 2002).

De esta forma, se pueden distinguir dos tipos de métodos de detección de infecciones (Ramalingam et al., 2002):

Métodos indirectos. Reconocen los anticuerpos específicos producidos por el sistema inmunitario como respuesta a la infección.
Métodos directos. Detectanal propio microorganismo o alguno de sus componentes, como proteínas o ácidos nucleicos.

La detección por métodos directos o indirectos del VIH (por ejemplo) ha permitido no solo reconocer a las personas infectadas y establecer medidas preventivas adecuadas, sino que además constituye una ayuda esencial en el seguimiento de los pacientes para conocer el pronóstico de la enfermedad y la eficaciadel tratamiento utilizado (Beelaert et al., 2002).

1.1.1 Métodos Indirectos

Constituyen la forma habitual para detectar el tipo de enfermedad infecciosa que afecta a un organismo, mediante la identificación de anticuerpos específicos contra el patógeno causante de la enfermedad y, se pueden dividir en: pruebas de Screening y pruebas confirmatorias (Schacker et al., 1996).

1.1.2 MétodosDirectos

Los métodos directos implicados en la detección de enfermedades infecciosas están basados en la detección del patógeno o alguno de sus componentes (especialmente ADN o ARN). Entre los métodos más usados se encuentran el cultivo vírico y la identificación del genoma vírico mediante técnicas moleculares (Schacker et al., 1996).

1.1.2.1 Cultivo vírico o celular

Aunque es la técnicamás específica para el diagnóstico de una infección, su utilización suele reservarse para estudios básicos de variabilidad genética, epidemiología molecular, patogénesis vírica o resistencia a fármacos, debido a la complejidad y riesgo que supone su realización (Ramalingam et al., 2002). En este caso, el cultivo se considera positivo por la demostración del efecto citopático o por la detección deproductos víricos como la transcriptasa inversa.

1.1.2.2 Técnicas moleculares

Aunque la detección de una infección por un determinado patógeno debe establecerse mediante la detección de un anticuerpo específico de este, puede ser conveniente la utilización de técnicas moleculares basadas en el reconocimiento de fragmentos del genoma del patógeno. Estas situaciones especiales se producen encasos de hipogammaglobulinemia, infección perinatal, infección silente o infección por variantes del patógeno que pueden escapar a la detección con las técnicas habituales serológicas (Schacker et al., 1996).

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es el método mas empleado para el diagnóstico molecular de una infección. Puede aplicarse directamente a la detección de ADN provírico a partir decélulas del paciente, o bien mediante una reacción de retrotranscripción previa (RT-PCR), realizada habitualmente en plasma, cuando la diana que se pretende localizar son las partículas de ARN vírico (Monis y Andrews, 1998).

1.1.2.2.1 Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

La técnica de PCR, diseñada al principio de la década de los 80 y desarrollada en los últimos años, ha tenido unimpacto revolucionario siendo aplicada en múltiples líneas de investigación tales como el diagnóstico de diferentes enfermedades genéticas e infecciosas, estudios de oncogénesis y polimorfismos genéticos (asociación a la predisposición de algunas enfermedades, tipificación en los trasplantes de órganos, identificación genética de los individuos, caracterización de especies, etc.), aplicaciones en...