Técnicas de coloracion

- Clasificación de técnicas de observación microscópica. Examen en fresco y técnicas de coloración.

La observación microscópica puede efectuarse mediante el examen en fresco de una suspensión microbiana, lo que permite visualizar microorganismos vivos y reconocer sus movimientos, apreciar su forma, tamaño, agrupaciones; o mediante un extendido coloreado, que dependiendo de la técnicautilizada, va a permitir diferenciar microorganismos, observar su morfología, tamaño, agrupación y algunos elementos no habituales (flagelos, capsula o endosporas).

- Colorantes y coloraciones: Definición. Clasificación.

Los colorantes son sustancias que pueden tener un origen natural o artificial y que sirven para poder identificar las estructuras de un microorganismo. A estos se los clasificaen básicos o cationicos, ácidos o anionicos y neutros. Esto está dado por la carga electrostática de la molécula y no por el pH de la solución.

Colorantes básicos:
Violeta de genciana.
Fucsina básica.
Rojo neutro
Cristal violeta.

Colorantes ácidos:
Fucsina acida
Eosina

Neutros:
Eosianato azul de metileno.


- Describir y ordenar los pasos previos a una técnica de coloración.Antes de efectuar una coloración es necesario realizar un extendido sobre la superficie de un portaobjeto, de forma que se obtenga una película delgada y uniforme.

Técnica:
1. Se ubica sobre la mesada un portaobjeto limpio.
2. Si el extendido se realiza a partir de un desarrollo microbiano obtenido de un medio solido o una muestra consistente, se coloca sobre el portaobjeto, con asabacteriológica, jeringa o pipeta, una gota de agua destilada estéril.
3. Con el asa se toma una pequeña cantidad de la muestra a examinar,
4. Se coloca la muestra sobre el portaobjeto y se la homogeniza con la gota de agua destilada estéril.
5. Se toma el portaobjeto entre el dedo pulgar y el índice, y se extiende la gota en el sentido del eje mayor, sin llegar a ninguno de los cuatro bordes, hastaobtener una película delgada y uniforme.
6. Se seca a temperatura ambiente o manteniéndolo a 40 cm de la llama del mechero.
7. Se fija.

La fijación tiene como objetivo que las bacterias queden adheridas al vidrio para que los lavados durante la coloración no arrastren los gérmenes y, de esta forma, que altere lo menos posible la morfología microbiana. Hay 2 métodos:
Físico o método de Koch(calor): consiste en realizar 3 pasajes lentos sobre la llama del mechero (debe dejarse enfriar entre los pases).
Químico (alcohol): se basa en cubrir el extendido con alcohol metílico y dejarlo en contacto durante 5 minutos.




- Describir los pasos a realizar en las técnicas más comúnmente utilizadas en Microbiología:
a).- Examen en fresco por contraste: Ej.: Tinta China.
b).- Coloraciónsimple: Ej.: azul de metileno.
c).- Coloración diferencial: Ej: Técnica de Gram y Ziehl Neelsen.


A)
El examen fresco
El examen fresco de una suspensión microbiana se usa para examinar muestras sin colorear, lo que evita los artificios que pueden crear la fijación y la coloración. Esta técnica permite observar microorganismos vivos (principalmente bacterias, hongos unicelulares, protozoosy helmintos) y ciertas funciones fisiológicas, como la movilidad, apreciar las distintas formas, tamaños y agrupaciones.
Técnica:
1. Tomar una gota de muestra con el asa bacteriológica esterilizada y depositarla sobre un porta objeto.
2. Colocar vaselina solida o parafina en los bordes de un cubreobjeto para disminuir el secado del preparado, que se ve favorecido por el tiempo y el calor delfoco luminoso.
3. Cubrir la gota con el cubreobjeto. Debe depositarse antes una arista para evitar que se formen burbujas.
4. Observar por medio de microscopio óptico compuesto, de fase de contraste o de campo oscuro.
En algunas ocasiones resulta de utilidad colocar previamente en el portaobjeto una gota azul de metileno o de tinta china y homogeneizarla con la muestra para facilitar la...