Técnicas de cultivo en microbiología
Páginas: 5 (1131 palabras)
Publicado: 24 de octubre de 2010
Departamento de Biología Celular
Laboratorio de Microbiología General
TÉCNICAS DE CULTIVO EN MICROBIOLOGÍA
OBJETIVO
Ensayar y comparar algunas de las técnicas de cultivo más comúnmente utilizadas en microbiología.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se siguió el protocolo descrito en la Práctica 1: Cultivo de Microorganismos, en: Guía de prácticas del Laboratorio de MicrobiologíaGeneral BC3361. 45 pp. (Universidad Simón Bolívar, Castelli y Rocha, 1999) con la única modificación de que no se realizó la preparación de los medios de cultivo.
RESULTADOS
Experiencia 1: Siembra por estriado en placa
Según el orden de estriado, en los tres casos (E. Coli, S. marescens y S. Aureus) se observa una disminución de la cantidad de colonias a pesar de que el tamaño de las mismasva en aumento, esto se pudo observar mejor en la placa con E. Coli.
S. marescens presentó una coloración rojiza que se hacía cada vez menos intensa sobre un aspecto mucilaginoso, a diferencia de E. Coli que presentó colonias brillantes de poco color, y S. Aureus que no presentó colonias tan brillantes sino, colonias de coloración pálida amarillenta.
Experiencia 2: Siembra porextendido en superficie
Se observaron colonias de E. Coli por casi toda la superficie de las tres placas. Se observó, en la placa donde se cultivó la dilución:
- 10-4, muchas pequeñas colonias,
- 10-5, una mediana cantidad de colonias, y
- 10-6, muy pocas colonias de gran tamaño.
Experiencia 3: Siembra en profundidad
En la placa sembrada con E. Coli a una dilución 10-2, seobservó un crecimiento por toda la placa una gran cantidad de colonias de pequeño tamaño. En las diluciones 10-4 y 10-5 se observó el crecimiento de dos tipos de colonias diferentes, unas más pequeñas y otras más grandes; sin embargo, ambas especies seguían un mismo patrón: en la dilución 10-4 habían muchas colonias medianas y pequeñas esparcidas por toda la placa, y en la dilución 10-5 habían algunascolonias grandes y medianas.
Experiencia 4: Siembra en agar inclinado en tubo
Las tres especies crecen como en la Siembra por estriado sobre el agar inclinado; sin embargo, en la punción, S. aureus crece sólo dentro de ella a diferencia de E. Coli y S. marescens que se han movido a los alrededores de la misma. En el tubo de E. Coli se observaron burbujas de gas en el agar.
Experiencia 5:Medios de cultivos selectivos y diferenciales
En la placa de agar nutritivo suplementado con estreptomicina, no crecieron colonias de E. Coli CSH36 pero sí unas cinco pequeñas tamaño de E. Coli.
En la experiencia con EMB Levine, las colonias de E. Coli CSH50 se mostraron incoloras y mucilaginosas, mientras que E. Coli mostró una coloración verde-morado tornasol.
DISCUSIÓN
Comose pudo observar al realizar la Siembra por estriado en placa en agar nutritivo (medio indefinido), E. Coli, un bacilo coliforme, forma colonias sin color, brillantes y convexas cuando se encuentran en sustratos blandos (Davis y col., 1973) a diferencia de S. marescens, también un bacilo coliforme, que produce un pigmento rojo (prodigiosin) que le da luminosidad a las colonias (Davis y col., 1973),y S. aureus, un Estafilococo que produce colonias delineadas, circulares y brillantes considerablemente opacas (Davis y col., 1973). En este caso, al comienzo las colonias no se ven aisladas debido a la gran concentración inicial de bacterias que al crecer tan cerca las colonias parecen fusionadas.
En las experiencias 2 y 3, se pudo observar que en general la concentración de la muestrasembrada es proporcional a la cantidad de colonias producidas, e inversamente proporcional al tamaño de las mismas; es decir, mientras más diluida se encuentre la muestra a sembrar las colonias tienden a ser menos numerosas y de mayor tamaño. Gracias a la siembra de diluciones seriadas, se puede determinar la concentración de la muestra inicial y observar las diferencias en detalle de las...
Laboratorio de Microbiología General
TÉCNICAS DE CULTIVO EN MICROBIOLOGÍA
OBJETIVO
Ensayar y comparar algunas de las técnicas de cultivo más comúnmente utilizadas en microbiología.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se siguió el protocolo descrito en la Práctica 1: Cultivo de Microorganismos, en: Guía de prácticas del Laboratorio de MicrobiologíaGeneral BC3361. 45 pp. (Universidad Simón Bolívar, Castelli y Rocha, 1999) con la única modificación de que no se realizó la preparación de los medios de cultivo.
RESULTADOS
Experiencia 1: Siembra por estriado en placa
Según el orden de estriado, en los tres casos (E. Coli, S. marescens y S. Aureus) se observa una disminución de la cantidad de colonias a pesar de que el tamaño de las mismasva en aumento, esto se pudo observar mejor en la placa con E. Coli.
S. marescens presentó una coloración rojiza que se hacía cada vez menos intensa sobre un aspecto mucilaginoso, a diferencia de E. Coli que presentó colonias brillantes de poco color, y S. Aureus que no presentó colonias tan brillantes sino, colonias de coloración pálida amarillenta.
Experiencia 2: Siembra porextendido en superficie
Se observaron colonias de E. Coli por casi toda la superficie de las tres placas. Se observó, en la placa donde se cultivó la dilución:
- 10-4, muchas pequeñas colonias,
- 10-5, una mediana cantidad de colonias, y
- 10-6, muy pocas colonias de gran tamaño.
Experiencia 3: Siembra en profundidad
En la placa sembrada con E. Coli a una dilución 10-2, seobservó un crecimiento por toda la placa una gran cantidad de colonias de pequeño tamaño. En las diluciones 10-4 y 10-5 se observó el crecimiento de dos tipos de colonias diferentes, unas más pequeñas y otras más grandes; sin embargo, ambas especies seguían un mismo patrón: en la dilución 10-4 habían muchas colonias medianas y pequeñas esparcidas por toda la placa, y en la dilución 10-5 habían algunascolonias grandes y medianas.
Experiencia 4: Siembra en agar inclinado en tubo
Las tres especies crecen como en la Siembra por estriado sobre el agar inclinado; sin embargo, en la punción, S. aureus crece sólo dentro de ella a diferencia de E. Coli y S. marescens que se han movido a los alrededores de la misma. En el tubo de E. Coli se observaron burbujas de gas en el agar.
Experiencia 5:Medios de cultivos selectivos y diferenciales
En la placa de agar nutritivo suplementado con estreptomicina, no crecieron colonias de E. Coli CSH36 pero sí unas cinco pequeñas tamaño de E. Coli.
En la experiencia con EMB Levine, las colonias de E. Coli CSH50 se mostraron incoloras y mucilaginosas, mientras que E. Coli mostró una coloración verde-morado tornasol.
DISCUSIÓN
Comose pudo observar al realizar la Siembra por estriado en placa en agar nutritivo (medio indefinido), E. Coli, un bacilo coliforme, forma colonias sin color, brillantes y convexas cuando se encuentran en sustratos blandos (Davis y col., 1973) a diferencia de S. marescens, también un bacilo coliforme, que produce un pigmento rojo (prodigiosin) que le da luminosidad a las colonias (Davis y col., 1973),y S. aureus, un Estafilococo que produce colonias delineadas, circulares y brillantes considerablemente opacas (Davis y col., 1973). En este caso, al comienzo las colonias no se ven aisladas debido a la gran concentración inicial de bacterias que al crecer tan cerca las colonias parecen fusionadas.
En las experiencias 2 y 3, se pudo observar que en general la concentración de la muestrasembrada es proporcional a la cantidad de colonias producidas, e inversamente proporcional al tamaño de las mismas; es decir, mientras más diluida se encuentre la muestra a sembrar las colonias tienden a ser menos numerosas y de mayor tamaño. Gracias a la siembra de diluciones seriadas, se puede determinar la concentración de la muestra inicial y observar las diferencias en detalle de las...
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