Técnicas de inmunofluorescencia

TÉCNICAS DE INMUNOFLUORESCENCIA
La inmunofluorescencia (IF) es una técnica que emplea anticuerpos conjugados a fluorocromos. Los fluorocromos son moléculas que al ser excitadas con la energía de unadeterminada longitud de onda son capaces de emitir energía de una longitud de onda mayor.
Se aplica en diagnóstico de patologías cutáneas y renales e investigación.
Las pruebas deinmunofluorescencia (IF) se basan en que, cualquier antígeno, puede ser marcado específicamente con un fluorocromo coloreado, a través de un anticuerpo (Ac) específico. Cuando se irradia este elemento con luzultravioleta o azul se hace fluorescente.
Cuando la reacción es positiva y se expone a la luz ultravioleta se producirá fluorescencia observable bajo el microscopio de inmunofluorescencia.
Es una pruebade diagnóstico serológico que tiene dos variedades principales:
a) Inmunofluorescencia directa (IF) aplicada fundamentalmente a la detección de antígenos en una muestra clínica
b)Inmunofluorescencia indirecta (IFI) aplicada a la detección de anticuerpos específicos en el suero del paciente frente a un determinado antígeno o a la detección de un antígeno en una muestra clínica.
MétodoDirecto.
En este método se utiliza antisuero marcado para cada sustancia; así, cuando el suero fluorescente se aplica a una extensión, procedente de un cultivo que contenga microorganismos que reaccionancon el antígeno homólogo, demostrándose una reacción específica antígeno-anticuerpo por fluorescencia de las bacterias revestidas con el anticuerpo. Utiliza anticuerpos conjugados a isotiocianato defluoresceína. La lectura se realiza en un microscopio de fluorescencia, que emite luz ultravioleta de una determinada longitud de onda.
Técnica: sobre un porta depositamos una muestra en la quebuscamos la presencia de un determinado antígeno. Añadimos un suero específico del antígeno problema marcado con isotiocianato de fluoresceína (conjugado). Si el antígeno problema se encuentra presente en...