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TÉCNICAS DE TINCIÓN 
INTRODUCCIÓN 
El  imperceptible  tamaño  de  las  bacterias  y  otros  microorganismos  así  como  la 
dificultad  para  observarlas  en  detalle  con  el  microscopio  óptico  por  causa  de  la 
falta  de  contraste  que  existe  entre  estos,   debido  a  que  son  usualmente 
transparente en el  medio que  les rodea;  hizo que  se  crearan  métodos para poder apreciarlas, siendo “los métodos más sencillos el de fijación y tinción, iniciados por 
Paul  Ehrlich  y  Robert  Koch,  los  que  permitieron  a  los  microbiólogos  distinguir 
muchas  características  estructurales normalmente vistas” así el uso de colorantes, 
es  el  medio  más  simple  de  aumentar  el  contraste.  Estos   pueden  utilizarse  para 
distinguir  entre   distintos  tipos de  células  o  para   apreciar  la presencia  de  algunos 
elementos  celulares,  como  flagelos,  esporas,  cápsulas,  paredes  celulares, 
mitocondrias, núcleos, membranas celulares, etc. 
Existen  numerosos  colorantes,  y  en  su  mayoría  son  compuestos  orgánicos 
naturales  que   tienen  alguna  afinidad  específica  por  los  materiales  celulares.  Los 
colorantes  que   se utilizan  usualmente  son  moléculas  cargadas  positivamente 
(cationes)  y  se  combinan con  intensidad  con  los  componentes celulares cargados 
negativamente,  tales  como  los  ácidos  nucleicos  y  los  polisacáridos  (azul  de 
metileno, el  cristal  violeta  y  la safranina); otros colorantes son moléculas cargadas 
negativamente  (aniones)  los  que  se  combinan  con  los  elementos celulares 
cargados positivamente,  como  son las  proteínas  (Eosina, la fucsina ácida y el rojo 
Congo).  Existe  otro  grupo  de  colorantes  conformado  por  sustancias liposolubles; 
los  colorantes  de  este  grupo  se  combinan  con los materiales lipídicos de la célula, 
usándose  generalmente  para  revelar  la  localización  de  los  depósitos  de  grasa 
(negro de Sudán). 
La tinción  de  Gram  es  uno  de  los  métodos  de  tinción  más  importantes  en  el 
laboratorio  de  microbiología.  Su aplicación práctica es innegable  sobre  todo  en  el 
trabajo  microscópico  de  rutina;  las  referencias  a  la   morfología  celular  bacteriana 
(cocos,  bacilos,  espirilos,  negativos  y  positivos fig1) se basan  precisamente  en  la 
tinción de GRAM* 

 
Fig.  1: Imagen  de  Cocos  (forma  esférica),  bacilos  (forma  alargada,  como 
bastones) y espirilos (forma espiral)*  
Esta  técnica  de   coloración  de  contraste  fue  descubierta  por  Hans  Christian Gram 
en 1884. Es  de  considerarse que la  reacción de Gram no es infalible ni constante; 
puede variar con el tiempo del cultivo y el pH del medio, y quizá por otras causas. 
La  capacidad de  las  células  para  captar  la  coloración  Gram  solo  es aplicable  de 

manera adecuada en bacterias; como puede advertirse en las células de vegetales 
y  animales  superiores,  que  no  conservan  uno  de  los  colorantes  de  los   que  está 
compuesta  la  técnica;  los  hongos microscópicos  se  tiñen con cierta irregularidad; los gránulos de micelios tienden a retener el colorante. 
El  fundamento de la  técnica se hace con base en las diferencias entre las paredes 
celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas. 
La  pared  celular  de  las  bacterias  Gram  positivas,  posee  una  gruesa  capa  de 
peptidoglucano.  Por el  contrario, la capa de peptidoglucano  de las Gram negativas 
es  delgada,  y  se  encuentra  unida   a  una  segunda  membrana plasmática  exterior 
(de  composición  distinta  a la  interna)  por  medio  de lipoproteínas. Tiene  una capa 
delgada  de  peptidoglicano  unida  a  una  membrana  exterior   por  lipoproteínas  La 
membrana  exterior  está  hecha  de  proteína,  fosfolípido  y  lipopolisacárido  (que se 
encuentra en la cara externa de la membrana externa de este tipo de bacterias) 
 

 
Fig  4: En ...