Técnicas De Visuallización Microscópica De Microorganismos

TÉCNICAS DE VISUALLIZACIÓN MICROORGANISMOS. EXAMEN EN CLASIFICACIÓN Y APLICACIONES.

MICROSCÓPICA DE FRESCO. TINCIONES:

1.- TECNICAS DE VISUALIZACION MICROSCOPICA DE MICROORGANISMOS 1.1.INTRODUCCION. EXAMEN DE LOS MICROORGANISMOS VIVOS. 1.1.1.- EXÁMEN EN FRECO 1.1.1.1.- PREPARACIONES HÚMEDAS. 1.1.1.2.- PREPARACION DE LA GOTA PENDIENTE. 1.1.1.3.- EXAMEN EN FRESCO CON NIGROSINA 1.1.2.-COLORACIONES VITALES 2.- PREPARACIONES FIJADAS Y COLOREADAS. 2.1.- FASES DE LAS TINCIONES 2.1.1.- CONFECCIÓN DEL FROTIS 2.1.2.- SECADO. 2.1.3.- FIJACIÓN. 2.1.4.- COLORACION. 2.1.5. LAVADO Y SECADO. 2.2.- CLASIFICACIÓN DE LAS TINCIONES 2.2.1.- TINCIONES SIMPLES 2.2.2.- TINCIONES DIFERENCIALES. 2.2.2.1.- GRAM. 2.2.2.2.- ZHIEL-NEELSEN 2.2.3.- TINCIONES ESTUCTURALES. 2.2.3.1.- TINCIONES DE FLAGELOS.2.2.3.2.- TINCION DE ESPORAS 2.2.3.3- TINCION DE CAPSULAS 2.2.3.4.TINCION DE METACROMÁTICOS. 3.- TINCIONES ESPECIALES 3.1.- TINCION DE NARANJA DE ACRIDINA 3.2.- TINCION DE RODAMINA-AURAMINA. 3.3.- TINCION DE CALCOFLUOR

CORPUSCULOS

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1.- TECNICAS DE MICROORGANISMOS

VISUALIZACION

MICROSCOPICA

DE

1.1.- INTRODUCCION. EXAMEN DE LOS MICROORGANISMOS VIVOS. EL examen microscópico nos informade la presencia o no de las bacterias, de su morfología, de sus características tintoriales etc. Es el primer paso que nos permitirá orientar el resto del examen para una perfecta identificación del agente etiológico de la enfermedad. Para el estudio microscópico de los microorganismos, existen métodos muy diferentes, cada uno de los cuales nos va a proporcionar información sobre distintosaspectos y propiedades de los microorganismos. Dependiendo del objetivo que se pretenda alcanzar, se seleccionará un método u otro. Se denomina observación vital, al tipo de examen que se utiliza para la investigación de los caracteres principales del microorganismo (movilidad bacteriana, morfología, estructura, observación de huevo, etc.). Los métodos que se emplean para este tipo de examen son: Examenen fresco: Preparaciones húmedas. Método de la gota pendiente Examen en fresco con nigrosina Coloraciones vitales. 1.1.1.- EXÁMEN EN FRECO La mayor parte de estas observaciones se realizan mediante la microscopia de campo claro, aunque la utilización de microscopia de contraste de fases, puede facilitar la visualización de los microorganismos. Las preparaciones deben de obtenerse de materialclínico fresco o de cultivos recientes (24 horas) y realizados en medios adecuados. Muestras como sedimentos urinarios, esputos o exudados pueden utilizarse directamente, mientras que si el material es demasiado espeso se puede diluir con solución salina estéril. La preparación se observa al microscopio con objetivo de inmersión y con poca intensidad de luz para facilitar la observación microscópica1.1.1.1.- PREPARACIONES HÚMEDAS. Se obtienen colocando una gota de liquido que contienen los microorganismos sobre un portaobjetos (limpio y seco), sobre el que recoloca un cubreobjetos. Si se parte de un producto sólido, se deposita primero una gota de agua estéril o solución salina 2

estéril sobre el portaobjeos, para posteriomente, con ayuda del asa de siembra (Previamente flameada yenfriada) realizar una suspensión del producto. 1.1.1.2.- PREPARACION DE LAGOTA PENDIENTE. Se utilizan portaobjetos especiales con una o varias excavaciones, se coloca una gota de la suspensión en el centro de un cubreobjetos (limpio y seco) con un asa previamente estéril. A continuación, recoloca el porta sobre el cubreobjetos, de forma que la gota queda suspendida con el centro de la excavación. Despuésse le da la vuelta rápidamente al portaobjetos manteniendo el cubre en su posición. El tamaño de la gota debe de ser el adecuado, para evitar una rápida evaporación, y lo suficientemente pequeña para evitar un contando con el portaobjetos. 1.1.1.3.- EXAMEN EN FRESCO CON NIGROSINA Mediante este método, se obtienen imágenes en las que se destacan las bacterias. 1.1.2.- COLORACIONES VITALES Se...