Técnicas histológicas

TECNICAS HISTOLOGICAS:
DEFINICION: se denomina técnica histológica a los distintos procedimientos a los que se somete a la materia organizada con el objeto de preparar células y tejidos para ser observados en el microscopio.
Métodos de observación:
a) In vivo: estudian al organismos en su estado natural
b) In vitro: estudian al organismo vivo pero en condiciones artificiales.
c) Postmortem: se los estudia después de su muerte. (esta es la técnica histológica propiamente dicha)
Técnicas IN VIVO: .Se utilizan técnicas de observación directa ayudadas por ciertos instrumentos ópticos. Los métodos más comunes son los utilizados para la observación de superficies, por ej. “el fondo de ojo”, “endoscopia” o “laparoscopia”, “ecografía”.
Pero la observación con el microscopio óptico eslimitada ya que pocos materiales biológicos son transparentes; y cuando lo son, carecen de contraste adecuado para posibilitar la diferenciación de las estructuras.
Así el contraste puede ser aumentado por métodos físicos o químicos. Los métodos físicos consisten en el uso de microscopios especiales como el de contraste de fase, el de interferencia o el de campo oscuro, que presentan almaterial contrastado o coloreado, por tener dispositivos adicionales.
Los métodos químicos son empleando colorantes para las técnicas in vivo llamados COLORANTES INTRAVITALES que son escasamente tóxicos para el organismo que los recibe y se introducen mediante inyección, por vía digestiva, vaporizando sobre las mucosas o simplemente por inmersión. Un ej. de colorante es la tinta china.

Técnicas INVITRO: los organismos son mantenidos con vida pero fuera de su hábitat natural. En algunos casos se mantienen con vida todo el organismo y en otros solo algunas de sus funciones vitales como por ej. la actividad enzimática.
Las ventajas de este método consisten en:
1) El organismo puede ser mantenido con vida fuera de su hábitat por mucho tiempo. (cultivos)
2) Si se quiere estudiar una porciónde él mas a fondo, por congelación pueden obtenerse secciones delgadas para realizar técnicas especiales de coloración para ser observados al microscopio óptico.
3) Sobre estos cortes por congelación también pueden realizarse técnicas especiales como de localización de enzimas o inmunohistoquimica.
El colorante utilizado en estas técnicas es el COLORANTE SUPRAVITAL.
En la práctica los métodospuramente in vitro son poco usados y lo usual es que se realicen combinados in vitro y post mortem.
Son ejemplos de estas técnicas: las citología exfoliativa o técnica de papanicolau, y el frotis de sangre.
Citologia Exfoliativa
Es una técnica para piel y mucosas. Es una técnica de observación in Vitro.
Consiste en raspar la superficie con una espátula, y cuando se raspa, se desprendencélulas; a la espátula se la pasa por un porta objeto donde quedan las células, y a las mismas hay que fijarlas en alcohol etílico al 96%. Se usa el colorante supravital ORANGE (básico). Se denomina como técnica i método del papanicolau. Este método no excluye a la biopsia, se complementa a ella.
Frotis de Sangre
Consiste en colocar una gota de sangre en un portaobjetos. Luego fijarla con un par degotitas de metanol y se lo colorea y luego se observa al microscopio. Consiste en el estudio microscópico de las células sanguíneas.
Técnicas POSTVITALES O POST MORTEM: es la técnica histológica propiamente dicha. Consta de 7 pasos:
1) Obtención del material
2) Fijación
3) Deshidratación
4) Inclusión aclaración
Impregnación enparafina
Inclusión propiamente dicha y creación del taco
5) Corte
6) Coloración Desparafinación
Hidratación
Coloración propiamente dicha
Deshidratación y aclaración.
7) Montaje...