Técnicas inmunológicas

- GUIA DE TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS 2010 INDICE 1. Interacción antígeno-anticuerpo 2. Interacción Secundaria Ag-Ac 2.a. Reacciones de precipitación 2.b. Técnicas inmunológicas basadas en reacciones de precipitación. Inmunodifusión Radial Inmunoelectroforesis 2.c. Reacciones de aglutinación 2.d. Concepto de título 3. Interacción primaria Ag-Ac 3.a. Inmunomarcación Inmunomarcación con Acs conjugados aENZIMAS Inmunomarcación con Acs conjugados a FLUOROCROMOS Citometría de Flujo 3.b. Radioinmunoanálisis y Técnicas radioinmunométricas 3.c. ELISA (Enzime Linked ImmunoadSorbent Assay) 4. Otras técnicas 4.a. Proteinograma electroforético 4.b. Nefelometría 4.c. Western Blot 5. Técnicas de tipificación de antígenos de histocompatibilidad 5.a. Técnicas serológicas 5.b. Técnicas moleculares 6. Crossmatch 7. Técnicas inmunológicas para estudiar la funcionalidad de los fagocitos Página 14 Página 15 Página 15 Página 16 Página 17 Página 18 Página 22 Página 22 Página 1 Página 1 Página 1 Página 2 Página 2 Página 2 Página 3 Página 5 Página 7 Página 7 Página 8 Página 8 Página 9 Página 12 Página 13

1. INTERACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO La unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una interacción reversibleen la que están involucrados enlaces nocovalentes. En la interacción in vitro de un antígeno (Ag) con su correspondiente anticuerpo (Ac) se distinguen dos etapas, la interacción primaria no visualizable y la interacción secundaria, que sigue a la anterior y se caracteriza por la aparición de un fenómeno visible como la aglutinación o la precipitación. Por otro lado, no siempre que se produce lainteracción primaria Ag-Ac, se produce la interacción secundaria, ya que, para conseguir fenómenos visibles, son indispensables determinadas concentraciones y características de los Ags y Acs. 2. INTERACCIÓN SECUNDARIA ANTIGENO-ANTICUERPO. Las técnicas inmunológicas que evidencian la interacción Ag-Ac a través de una reacción secundaria (precipitación o aglutinación) son, generalmente, máseconómicas y sencillas que aquellas que permiten visualizar la interacción primaria (ver más adelante). 2.a. Reacciones de precipitación Al mezclar cantidades suficientes de Ag soluble con Acs específicos, la interacción Ag-Ac puede dar lugar a una red capaz de ser visualizada como un precipitado. Esa red de la que hablamos, no es otra cosa que grandes complejos inmunes (CI) formados por la interacciónAg-Ac. Tal como se observa en la figura, cuando se agregan concentraciones crecientes de Ag soluble a una cantidad fija de suero conteniendo Acs específicos, a medida que la cantidad de Ag agregado aumenta, la cantidad de precipitado se incrementa hasta alcanzar un máximo, luego del cual declina. En un extremo de la curva de precipitación, cuando se agregan pequeñas cantidades de Ag, los CI se formanen exceso de Ac. En el otro extremo, al agregar grandes cantidades de Ag, los CI se forman en exceso de Ag siendo pequeños y probablemente constituidos por una molécula de Ac y dos de Ag. Entre estas dos situaciones extremas se encuentra la zona de equivalencia, en donde la relación Ag-Ac permite la formación de grandes redes de CI que precipitan. Exceso de Ac Equivalencia Exceso de AgCantidad de Ag agregado La reacción de precipitación depende de la VALENCIA del Ac y del Ag. La valencia del Ac da idea del número de sitios que posee para reconocer al Ag. De esta manera, un Ac bivalente posee dos sitios capaces de reconocer al Ag. Del mismo modo, la valencia de un Ag nos habla del máximo número de epitopes que posee. Para que se pueda producir la interacción secundaria Ag-Ag con laconsecuente formación del precipitado, tanto el Ag como el Ac deben ser, al menos, bivalentes.

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La asociación entre Ac bivalentes y Ag monovalentes (un único epitope no repetido) no permite la formación de CI precipitantes.

La asociación entre Ac bivalentes y Ag multivalentes permite la formación de CI precipitantes. El Ag multivalente puede presentar un sólo epitope repetido o varios...