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UNIV DIAG 2000;1(2):31-41

LABORATORIOS BETERÁ

Electroforesis en geles de poliacrilamida: fundamentos,
actualidad e importancia
Dra.Hilda Marilín García Pérez1

RESUMEN
Mediante la electroforesis es posible separar moléculas biológicas en dependencia fundamentalmente de su carga bajo la influencia
de un campo eléctrico. Se dio una visión general de la electroforesis en geles de poliacrilamidapara proteínas en condiciones
nativas o desnaturalizadas, se incorporaron nuevos conocimientos tomados de la literatura reciente a los conceptos tradicionales
de este método, como son la adición de compuestos de restricción de la difusión y que aumentan la estabilidad de los geles. Se
ejemplificó el comportamiento anómalo de algunas proteínas en la determinación del peso molecular porelectroforesis en geles
de poliacrilamida en condiciones desnaturalizadas.
Palabras clave: electroforesis, poliacrilamida, geles.

La electroforesis es un método analítico –
semipreparativo, en el que se separan biomoléculas,
en dependencia entre otros factores de su carga y
bajo la acción de un campo eléctrico, fue empleado
por primera vez por Tiselius en el año 1937.
Raymond y Weintraub en 1959 emplearoncomo
soporte para la electroforesis un gel de
poliacrilamida (PAGE), posteriormente el método
fue perfeccionado por varios investigadores como
Davis y Ornstein. La popularidad de este creció
rápidamente y se logró un aumento de la resolución.
El dodecil sulfato de sodio (SDS) se introduce en
esta técnica en 1970, y ya en 1972 se emplean
agentes reductores y SDS en la determinación del
pesomolecular de proteínas en lo que se denominó
electroforesis en geles de poliacrilamida con SDS
(SDS-PAGE). En este trabajo se da un bosquejo
general de la electroforesis, si se tiene en cuenta
el desarrollo desde su surgimiento hasta el presente.

DESARROLLO

1. Fundamentos de la electroforesis
La electroforesis es la migración de solutos
iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico;
Estas partículasmigran hacia el cátodo o ánodo
(electrodos - y +), en dependencia de una

1

Master en Ciencias Bioquímicas. Investigadora Agregada.

combinación de su carga, peso molecular y
estructura tridimensional.
Es de destacar que a escala analítica, los
métodos electroforéticos son de alta sensibilidad,
poder de resolución y versatilidad, y sirven como
método de separación de mezclas complejas de
ácidosnucleicos, proteínas y otras biomoléculas,
donde aportan un potente criterio de pureza. Se
pueden conocer también mediante estas técnicas,
las características ácido-básicas de las proteínas
presentes en un extracto crudo, lo que da la
información necesaria si se pretende realizar una
separación cromatográfica basada en diferencias
de carga. Es útil además para determinar otros
parámetros como pesomolecular, punto isoeléctrico
y número de cadenas polipeptídicas de las
proteínas.
La velocidad de migración (v) de la partícula
es directamente proporcional al producto de su
carga efectiva (q) y el gradiente de potencial
eléctrico (E) e inversamente proporcional al
coeficiente de fricción (f) relativo a la talla y forma
de la molécula, o sea, a la resistencia que le ofrece
el medio.
V=qE/f

Lamovilidad electroforética (Me) es un caso
particular de la velocidad de migración de un ión,

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cuando se aplica un campo eléctrico de 1 V/cm.
Su signo es igual al de la carga de la partícula.
La velocidad de migración electroforética
depende de la densidad de carga de la molécula
(relación carga / peso), del voltaje aplicado y de la
porosidad del gel de electroforesis. El voltaje no se
puedeincrementar indiscriminadamente porque se
genera un excesivo calor. En contraste, al aplicar
bajo voltaje puede ocurrir una pobre separación,
por causa de la difusión por tiempo muy prolongado
de la corrida electroforética.1
La mayoría de las biomacromoléculas
(proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos) poseen
determinada carga eléctrica con grupos aniónicos
y catiónicos capaces de disociarse....