Unidad Orcina

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Biotecnología de la Reproducción Porcina: Estado actual y futuro de las técnicas de análisis seminal

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Artículo Científico

Sergi Bonet, María Dolores Briz, Elisabeth Pinart, Silvia Sancho, Eva Bussalleu, Marc Yeste, Isabel Casas Estela García, Anna Fàbrega y Eva Torner. TechnoSperm. Centro de I+D+i en Biotecnología de la Reproducción Porcina. Universidad de Girona.www.technosperm.com

La biotecnología de la reproducción porcina incluye el conjunto de técnicas derivadas de la biología celular y molecular destinadas a garantizar la bioseguridad y la trazabilidad reproductivas, incrementar el rendimiento reproductivo y asegurar la reproducción asistida (Bonet et al, 2006).

Biotecnología de la Reproducción Porcina

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Entre las técnicas más utilizadas enbiotecnología de la reproducción porcina destacan: a. La inseminación artificial (IA) (convencional, postcervical e intrauterina). b. La fecundación in vitro (FIV). c. La inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI). d. La vitrificación embrionaria. e. La transferencia embrionaria (TE) no quirúrgica. f. La filtración seminal. g. La refrigeración y criopreservación de espermatozoides. h. Elsexaje de espermatozoides y de embriones. i. La clonación reproductiva o terapéutica. j. La transgénesis. Para el correcto desarrollo de dichas técnicas es preciso previamente llevar a cabo un exhaustivo análisis de la calidad seminal. A continuación, se detallan el conjunto de metodologías que llevamos a cabo en nuestro Centro de I+D+i (TechnoSperm) para determinar la calidad seminal y diagnosticarsus patologías.

Fig.1. Imagen al microscopio electrónico de barrido de espermatozoides aberrantes con la cola enrollada. Apréciese las distintas intensidades de enrollamiento y su disposición con respecto a la cabeza del espermatozoide (Bonet et al, 2000).

La calidad espermática de los eyaculados o de las dosis seminales
Incluye los siguientes parámetros: concentración, motilidad,morfología, viabilidad espermática e integridad de membranas, del ADN y de proteínas celulares o plasmáticas. La concentración, motilidad y morfología espermáticas se determinan mediante una Cámara de Makler, un microscopio óptico dotado de contraste de fases, una cámara digital y un programa informático de análisis seminal (CASA, Computer Assisted Semen Analysis, o ISAS, Integrated Semen Analisis System).Para estudios que requieren mayor detalle de la morfología espermática puede recurrirse a la microscopía de contraste interferencial de Nomarski y a la microscopía electrónica de barrido o de transmisión (Bonet et al. 2000). La viabilidad espermática e integridad de membranas suele determinarse mediante la tinción específica con fluorocromos y el em-

Fig.2. Integridad de membranas. Múltiplemarcaje con fluorocromos y exámen al microscopio óptico de fluorescencia. Bis-benzamida: ADN (Azul: células viables). Ioduro de Propidio: ADN (Rojo: células no viables). Mitotracker Green FM: Vaina mitocondrial (Verde intenso: integridad). Alexa Fluor 488: Acrosoma (Verde debil: intacto) (Bussalleu et al. 2005).

pleo de un microscopio de fluorescencia o de un citómetro de flujo (Bussalleu et al,2005). La integridad de las membranas plasmáticas y acrosomales también puede determinarse mediante el test ORT (Osmotic Resistance Test) o el HOST (Hypoosmotic Swelling Test) y se basa en el sometimiento de los espermatozoides a soluciones salinas hipoosmóticas y su posterior estudio al microscopio óptico de contraste de fases.

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Fig. 3: Viabilidad espermática. Doble marcaje confluorocromos y examen con el Citómetro de flujo. Yoduro de Propidio (IP) (Rojo/espermatozoides no viables) – SYBR-14 (Verde/espermatozoides viables). (Bonet et al., 2008).

Fig. 4. HOST (Test de Endosmosis). H+: espermatozoide con hinchamiento. H-: espermatozoide sin hinchamiento. El hinchamiento demuestra la correcta funcionalidad de las membranas al retener agua para equilibrar la presión osmótica...