Universitaria

ESTRUCTURA BACTERIANA Y COLORACIONES


Natalia Jiménez Quiceno. BSc, MSc.
INTRODUCCIÓN

Las técnicas de observación microscópica pueden dividirse en: exámenes en fresco que son preparaciones sin teñir y exámenes de preparaciones coloreadas, que pueden ser vitales para microorganismos vivos y tinciones, para células muertas.

Examen en fresco: esta técnica permite conocer algunas de lascaracterísticas de los microorganismos como la morfología, el tamaño y el movimiento, etc. Adicionalmente posibilita observar la presencia de otros elementos formes, como leucocitos, cristales, etc, que pueden ser de gran ayuda en la valoración de las muestras.

Es una técnica fácil de realizar que consiste en depositar el material a estudiar entre un portaobjetos y un cubre objetos(laminilla), para posteriormente observarlo con objetivo de mediano poder (40X). Si el material a evaluar es sólido se debe emulsionar en una gota de agua destilada o solución salina, si es líquido, se debe depositar directamente entre lámina y laminilla.
Si el producto va a permanecer mucho tiempo en el portaobjetos, es conveniente prevenir la desecación mediante la aplicación de parafina en losbordes inferiores del cubreobjetos.


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Cuando se va a describir la movilidad de los microorganismos se debe diferenciar el movimiento browniano, que es debido a la colisión de los microorganismos con las moléculas del líquido que los rodea, de la verdadera movilidad, la cual se manifiesta por el desplazamiento de los microorganismos a grandes distancias y en una dirección determinada,aunque a veces pueden apreciarse rotaciones o giros. Los desplazamientos cortos y sin sentido se deben al movimiento browniano.

La desventaja del examen en fresco es que los microorganismos vivos son casi incoloros y no se pueden visualizar fácilmente al microscopio óptico normal cuando se encuentran suspendidos en agua, de ahí que se utilicen colorantes para incrementar su contraste con elentorno que los rodea y de esta forma hacerlos visibles.

Examen de preparaciones coloreadas: Las técnicas de coloración permiten la observación morfológica con un mejor contraste que en el examen en fresco, así como la observación de estructuras celulares.

La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos solubles en agua (generalmente en forma de sales) que tienen alguna afinidadespecífica por los materiales celulares. Pueden dividirse en dos grupos: ácidos y básicos. El colorante es ácido si la porción coloreada tiene carga negativa, es decir, si tiene un anión coloreado, siendo en este caso repelido por estructuras de la célula que presenten la misma carga, como es el caso de la superficie bacteriana. El colorante se denomina básico si la porción coloreada es el catión,cargado positivamente y con afinidad por estructuras de la célula con carga negativa, como es la superficie celular.
Las bacterias toman mejor los colorantes básicos, como son el cristal violeta, el azul de metileno y la safranina. La eosina es un colorante de tipo ácido, así como la nigrosina.

Existen distintos tipos de tinción:

1.-Tinción simple: Se utilizan para observar la morfologíacelular, el tamaño y el agrupamiento bacteriano. Esta técnica utiliza sólo un colorante, que generalmente tiñe a los microorganismos y se denomina coloración directa.
Cualquier colorante es válido para este tipo de tinción, aunque los más utilizados son: el Azul de metileno, el Cristal violeta y la Fucsina

El método para realizar una tinción simple:
a. Hacer un frotis sobre un porta objetosy dejar secar.
b. Fijar al calor
c. Cubrir la preparación con el colorante elegido, durante el tiempo especificado,
d. Lavar con agua, arrastrando todo el exceso de colorante,
e. Secar al aire o al calor suave,
f. Observar al microscopio con objetivo de 100x o alto poder.


Las bacterias se verán teñidas del mismo color que el colorante que se utilizó....