universitarios

PRUEBA DE VIABILIDAD
CON TETRAZOLIO

Juan Daniel Padilla-Laboratorio Central de Referencia
laboratorio.analisis@snics.gob.mx
danielpadilla7@hotmail.com

ÍNDICE
1. Antecedentes
2. Objetivos
3. ¿Qué es la prueba de viabilidad con Tz?
4. Método
5. Problemas comunes
6. Otros usos de la prueba
7. Realización de pruebas
8. Resultados
9. Tolerancias
10. Práctica

1.ANTECEDENTES…
1876: DIMITRIEWICZ, cortó semillas en orden para

determinar su viabilidad observando las propiedades de
los tejidos incubándolos en ácido sulfúrico
 1906: QVAM fue el primero en usar la respiración como

un indicador de viabilidad en semillas, midiendo la
emisión de dióxido de carbono
 1911: P. LESAGES, similar pero en Hidróxido de potasio,

observando incremento en el amarillamientode la
solución con incremento en la pérdida de viabilidad

…ANTECEDENTES…
 1918: W COOKER y HARRINGTON evaluaron actividad

enzimática (peroxidasas entre otras) como indicador
de viabilidad en semillas
 1926: DAVIS estudió el efecto de la edad en semillas en

la actividad enzimática
 1939: LAKON estudió el deterioro en semillas de

cereales descubriendo un patrón con el cualdedujo la
importancia de los diferentes tejidos del embrión en el
desarrollo de una plántula normal. Comienzan
evaluaciones con sales de tetrazolio (KHUN premio
Nobel)

…ANTECEDENTES…
 1940: LAKON descubre que los tejidos esenciales no se

colorean en semilla no viables, denominando esto
como ensayo de visión topográfica y publica finalmente
el método topográfico de selenio.
 1942: LAKONpublica la prueba topográfica de

tetrazolio para la determinación de la viabilidad en
semillas

2. OBJETIVOS
 Hacer una rápida estimación de la viabilidad de
las semillas
 Estimar al final de la prueba de germinación la

viabilidad de aquellas semillas que permanecen
latentes

3.¿QUÉ ES LA PRUEBA DE
VIABILIDAD CON TETRAZOLIO?
 Viabilidad: Capacidad de germinar

 PruebaBioquímica para determinar la Viabilidad
 Detección de signos de vida o actividad
metabólica en las semillas
 LIMITACIÓN: La Prueba TZ no evalúa la capacidad

de división celular y desarrollo.

¿CÓMO MIDE LA VIABILIDAD LA
PRUEBA DE TZ?

 Iniciación de respiración
 Actividad de las deshidrogenasas involucradas

en la respiración + Solución de Tetrazolio
2,3,5 trifenil cloruro detetrazolio
(Solución Incolora)

Trifenil Formazan
(Roja e Insoluble)

HIDRÓGENO

 Evaluación en base a patrones de tinción
LIMITACIÓN: La prueba de tz solo indica
tejidos vivos y muertos.

4. MÉTODO…
 Materiales
 400 semillas de la fracción pura (en 4 repeticiones de 100)
 Solución de Tetrazolio (pH 6.5-7.5)
 Bisturí
 Papel filtro
 Microscopio o lámpara con lupa
Cristalería

…MÉTODO…
 Preparación de la solución

de TZ 1%
 Usar agua destilada
 Pesar 10 g de TZ por cada
litro de solución
 Utilizar equipo de
protección personal
 Disolver con un agitador
 Vaciar en envase ámbar



Uso de soluciones buffer para
preparar la solución de TZ
Solución


Disolver 9.078 g de
KH2PO4 en 1000 ml de
agua Solución



Disolver 9.472 g deNa2HPO4 en 1000 ml de
agua



Mezclar 2 partes de la
solución 1 con 3 de la
solución 2 y adicionar el TZ

…MÉTODO…
1. Pretratamiento: En agua o papel a 20°C
2. Preparación para la tinción: Corte, pinchado o
3.
4.

5.
6.

ninguna
Tinción: Con solución de TZ al 1% a 30°C
Preparación para la evaluación: desprender
mitades, quitar testa
Evaluación: Área sin teñir permitida
En lasespecies con semillas duras=incisión

…MÉTODO…
 Pretratamiento (humedecimiento de la

semilla)
 Para facilitar el corte
 Dos formas:
 Humedecimiento lento: entre papel o sobre papel
 Humedecimiento rápido: Inmersas en agua

Nota: Para leguminosas el tiempo se puede
extender hasta 22 horas

…MÉTODO…
 Preparación (exponer los tejidos antes de la

tinción)
 Para facilitar...