Urea

UREA-UV

Urea
Ureasa -GLDH. Cinético UV
Determinación cuantitativa de urea
IVD

4.
5.

Mezclar y leer las absorbancias a los 30 s (A1) y a los 90 s (A2).
Calcular: ∆A= A1 – A2.

Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DEL METODO
La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en
amoníaco (NH3) y anhídrido carbónico (CO2).
El amoníaco formado se incorporan alα-cetoglutarato por acción de la
glutamato deshidrogenasa (GLDH) con oxidación paralela de NADH a
NAD+ :
Ureasa

Urea + H2O + 2 H ⎯⎯⎯ ⎯→ 2 NH3 + CO2
+

GLDH

2 NH3 + α-Cetoglutarato + NADH ⎯⎯⎯ → H2O + NAD + L-Glutamato
⎯
La disminución de la concentración de NAD+ en el medio es proporcional
a la concentración de urea de la muestra ensayada1.
+

SIGNIFICADO CLINICO
La urea es el resultado finaldel metabolismo de las proteínas; se forma en
el hígado a partir de su destrucción.
Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso
de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia cardiaca, hemorragias
gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales 1,4,5.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clínicos y de laboratorio.REACTIVOS
TRIS pH 7,8
80 mmol/L
R1
6 mmol/L
Tampón
α-Cetoglutarato
Ureasa
3750 U/L
R2
Glutamato deshidrogenasa (GLDH)
6000 U/L
Enzimas
NADH
0,32 mmol/L
UREA CAL
Patrón primario acuoso de Urea 50 mg/dL
PREPARACION
Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( → ) el contenido de un vial de R 2
Enzimas en un frasco de R 1 Tampón.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.Estabilidad: 6 semanas a 2-8ºC o 7 días a 15-25ºC.
CONSERVACION Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a
2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos
fuera de la fecha indicada.
UREA CAL
Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales biencerrados
a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancia (A) del Blanco a 340 nm < 1,00.

MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
(Nota 1)
.
- Equipamiento habitual de laboratorio
MUESTRAS
1
- Suero o plasmaheparinizado : No usar sales de amonio o fluoruro
como anticoagulantes.
1
- Orina : Diluir la muestra al 1/50 con agua destilada. Mezclar.
Multiplicar el resultado obtenido por 50 (factor de dilución); Evitar el
crecimiento bacteriano, manteniendo el pH < 4.
La urea es estable 5 días a 2-8ºC.

CALCULOS
( ∆A ) Muestra
x 50 (Conc. Patrón) = mg/dL de urea en la muestra
( ∆A ) Patrón
10 mg/Lurea BUN dividido por 0,466 = 21 mg/L de urea = 0,36 mmol/L urea1.

Factor de conversión: mg/dL x 0,1665 = mmol/L.
CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar
el instrumento, los reactivos y el calibrador.Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las
tolerancias.
1

VALORES DE REFERENCIA
Suero: de 15 a 45 mg/dL (2.49-7.49 mmol/L)
Orina:
de 20 a 35 gr/24 horas
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia.
CARACTERISTICAS DEL METODORango de medida: Desde el limite de detección de 1,82 mg/dL hasta el
limite de linealidad de 500 mg/dL.
Si la concentración es superior al limite de linealidad, diluir la muestra 1/2
con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Precisión:

Media (mg/dL)
SD
CV (%)

Intraserie (n=20)
41,9
146
0,89
2,55
2,13
1,74

Interserie (n=20)
39,96
144
1,10
2,79
2,76
1,93...