Ureasa

Ureasa
Principio: Determinar la capacidad de un organismo de desdoblar la urea, formando dos moléculas de amoníaco por acción de la enzima ureasa.
Objetivo: Diferenciar los géneros Trichosporon y Malassezia de Candida siendo (+) en los dos primeros. Tener en cuenta que C. krusei puede ser ureasa positiva. Las levaduras del género Malassezia son incapaces de desarrollarse en el medio decultivo utilizado para esta prueba bioquímica, sin embargo se lo utiliza igual porque la ureasa de estos hongos se libera al lisarse sus células dando la reacción positiva sin que se observe crecimiento.
Bases bioquímicas:   El sustrato de la ureasa, la urea, es una diamina del ácido carbónico, que es desdoblada fácilmente por esta enzima (la reacción química se puede consultar en el apunte de TPde dermatofitos)
Medios empleados: Se puede utilizar el Agar urea de Christensen o la prueba de urea líquida.
Procedimiento:
1. Estriar la cepa incógnita en el medio de cultivo.
2. Incubar a 28ºC durante tres días y observar el cambio de color del indicador.
Interpretación:      + : viraje al rojo (medio alcalino) . (Figura 5)
- : si no se produce cambio de color luego de 7 días de   incubación.
Fermentación de glucosa
Principio: Las pruebas fermentativas se basan en la propiedad que tienen ciertas levaduras de utilizar azúcares en anaerobiosis. Esta propiedad varía desde una fermentación vigorosa a ausencia de fermentación según los géneros de las levaduras de que se traten.
Objetivo: Diferenciar los géneros Trichosporon de Candida. El primero no es capaz de fermentar la glucosamientras que todas las especies del género Candida pueden utilizar glucosa en anaerobiosis. Por su parte, Malassezia spp. no puede desarrollarse en los medios utilizados para evaluar esta propiedad por ser lipofílicas,.
Bases bioquímicas: Se utiliza un medio basal sin hidratos de carbono que tenga los nutrientes necesarios para la síntesis de enzimas que participan en el transporte e hidrólisis delos carbohidratos, al cual se le adiciona el azúcar en estudio (en este caso glucosa).
Las propiedades fermentativas de un microorganismo se demuestran por la producción de ácido y de gas en atmósfera anaerobia. La acidez se demuestra por el cambio de color del indicador de pH y cuando hay producción de gas este puede demostrarse por su acumulación en campanas de Durham invertidas (si se trabajaen medios líquidos) o por elevación o ruptura del medio (si se trabaja con medios agarizados, donde debe agregarse vaselina estéril en la superficie del medio para producir anaerobiosis).
Medios empleados: En el presente trabajo práctico, se utilizará el medio líquido de Wickerham para fermentación con campanas de Durham invertidas.
Procedimiento:
1. Preparar una suspensión densa (de turbiedadde 2 a 3 Mac Farland) en agua destilada estéril a partir de un cultivo de 24 a 48 hs. de incubación.
2. Inocular una ansada de la suspensión de levadura al tubo de fermentación con glucosa al 2%.
3. Incubar a 28ºC y leer a los 3, 7 y 15 días.
Interpretación:      +  :  Se observa acumulación de gas (CO2 producto de la fermentación) en el tubo de Durham.
-  :    No se observa producción de gasaunque puede observarse desarrollo. (Figura 5)
CARACTERÍSTICAS DE LA REPRODUCCIÓN VEGETATIVA
1-Crecimiento en medio líquido
Principio: Esta técnica se utiliza para la observación rutinaria de las características micromorfológicas de las levaduras.
Objetivo: diferenciar los géneros Trichosporon y Candida a través de diferencias micromorfológicas y por la capacidad de generar crecimiento en formade película en la superficie del medio líquido. Al igual que en el caso de la evaluación de la fermentación, las levaduras del género Malassezia, al ser lipofilicas, no pueden desarrollarse en los medios utilizados en esta prueba, para evaluar la micromorfología de estos hongos se deben utilizar medios de cultivo con ácidos grasos.
Medios empleados: Extracto de malta al 3%.
Procedimiento:...