urocultivo

IDENTIFICACIÓN

Análisis microbiológico de una muestra de orina
El propósito del análisis microbiológico de una muestra de orina es en primer
lugar determinar si existe una infección y, si existe, identificar el
microorganismo que la produce. Para determinar si existe infección
debemos hacer un recuento del número de microorganismos que hay por mL
de orina. Si el número de microorganismos es:Hacer una Tinción de Gram (a partir de una colonia crecida en agar CLED)
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> 105 /mL
<103/mL
Entre 103 y 104/mL

hay infección
no hay infección
es dudoso. Repetir el análisis

(Observar el crecimiento en Agar MacConkey y volver a comprobar si es un
microorganismo Lactosa positivo o Lactosa negativo. Anotar el resultado)
Hacer la prueba de la oxidasa (sobre la placa de agar Nutritivo)

Paradeterminar el microorganismo que produce la infección hay que hacer
una identificación del microorganismo que previamente hemos aislado.

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RECUENTO
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Si es una levadura
o Sembrar en agar Sabouraud
o Incubar a 28ºC
o Realizar una Galería de Identificación API C AUX
Si es un Bacilo Gram Negativo
o Sembrar en Agar Nutritivo y en Agar MacConkey
o Incubar a 37ºC /24 horas

Hacer una dilución1/50 de la muestra de orina Para ello depositar 0,5
mL de orina en un matraz que contiene 24,5 mL de diluyente estéril.
Sembrar 0,1 mL de la dilución 1/50 en:
o Agar CLED
o Agar Sangre
(Agar CLED= Agar Cistina Lactosa Deficiente en Electrolitos.
Este agar se utiliza porque permite el crecimiento de la
mayoría de los patógenos urinarios y evita el crecimiento
invasivo de Proteus. Agar Sangre, es unagar que permite el
crecimiento de microorganismos difíciles (Staphylococcus y
Streptococcus) que no son capaces de crecer en otros medios
como el agar CLED. )
Incubar a 37 ºC /24 horas (Observar el crecimiento en Agar CLED y
anotar si es un microorganismo Lactosa positivo o Lactosa negativo)
Contar todas las colonias que aparecen sobre una de las placas (elegir
la placa que tenga más colonias)Expresar el resultado como:
número de colonias x 10 x 50= UFC /mL de orina
Si el número de colonias en la placa es más de 300 el resultado será:
> 300 x 10 x 50 UFC/mL de orina)

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Si el microorganismo es Oxidasa negativo, sembrar una Galería de
Identificación API 20E. Incubar a 37ºC/24 horas y hacer la lectura
de la galería.
Si el microorganismo es Oxidasa positivo, sembrar una Galería deIdentificación API 20 NO E. Incubar a 37ºC/24 horas y hacer la
lectura de la galería
Si es un Coco Gram Positivo

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Siembra en Agar Nutritivo yen Agar Manitol Salado
Incubar a 37ºC/24 horas

(Observar el crecimiento en Agar Manitol Salado y comprobar si es Manitol
positivo o Manitol negativo. Anotar el resultado)
Hacer la prueba de la Catalasa (sobre la placa de agar Nutritivo)
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Si elmicroorganismo es Catalasa negativo, sembrar una galería de
identificación API Strep. Incubar a 37ºC/24 horas y hacer la lectura
de la galería
Si el microorganismo es Catalasa positivo, sembrar una galería API
Staph. Incubar a 37ºC/24 horas y hacer la lectura de la galería.

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LECTURA DE ALGUNAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Prueba de la Oxidasa
Añadir sobre las colonias de la placa de Agar Nutritivo unas gotas deReactivo de la oxidasa (clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina al 11% en
agua)

Agar CLED= Agar Cistina Lactosa Deficiente en Electrolitos
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Si crecen colonias amarillas el microorganismo es lactosa positivo
Si crecen colonias azules el microorganismo es lactosa negativo

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Fundamento: Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Azul de
Bromotimol Si el microorganismo fermentala lactosa el pH del medio
disminuye y el indicador vira a amarillo

Fundamento: Si el microorganismo es oxidasa positivo es capaz de oxidar el
reactivo volviendolo de color azul
Prueba de la Catalasa
Añadir sobre las colonias de la placa de Agar Nutritivo unas gotas de
H202 10 vol.

Agar MacConkey
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Si aparece una coloración azul-violeta el microorganismo es oxidasa
positivo
Si no aparece...