UT9 T Cnicas De Siembra

UT.9 TÉCNICAS DE SIEMBRA

Para poder estudiar debidamente los microorganismos se necesita poder cultivarlos en condiciones de laboratorio y por tanto, inicialmente deben ser aislados. Para ello se dispone previamente de muestras que muchas veces suelen presentar los siguientes problemas:
No existe la cantidad suficiente del microorganismo que se busca.
Que las muestras contengan varios tipos demicroorganismo y se necesite aislar solo uno, para obtener un cultivo puro.

1- MÉTODOS DE SIEMBRA O INÓCULO

En microbiología, el término sembrar significa introducir de modo artificial una mínima parte de una muestra, en un medio de cultivo apropiado, con el objetivo de averiguar si los microorganismos son capaces de reproducirse.
Sembrar o inocular son términos equivalentes.
Un inóculo es laporción de la muestra que se pone en contacto con el medio de cultivo. El término resiembra alude a la transferencia de una muestra microbiológica (inoculo) desde un medio de cultivo a otro.
Para sembrar se precisa una muestra, que puede ser líquida o sólida, un medio de cultivo, ya sea sólido, semisólido o líquido y un instrumento para sembrar (asa de siembra, asa de picadura, pipeta graduada opipeta Pasteur).
A veces la siembra de una muestra viene dada por la necesidad de conocer el número y la cualidad de contaminantes que posee, haciéndose necesario su aislamiento inicial y la obtención, dentro de las posibilidades de técnicas y tiempo, de cultivos puros.
Sea cual sea la motivación y el objetivo del inóculo presentamos unas normas de cumplimiento general que facilitan la manipulaciónde los inóculos y que hacen de las siembras una operación más segura:
La manipulación de cultivos y muestras se hará en condiciones de asepsia, utilizando material estéril y trabajando alrededor de la llama del mechero Bunsen a una distancia máxima de 15 cm.
Las muestras sólidas se toman con asa de siembra, mientras que las muestras líquidas se pueden tomar con asa de siembra, pipetas graduadas,pipetas Pasteur o micropipetas con punta larga desechable, estériles.
Si se utilizan pipetas graduadas, tendrán algodón graso en la abertura superior y se utilizarán con prepipeta.
Nunca se pipeteará con la boca.
Las pipetas utilizadas con material biológico se dejarán en solución germicida, y luego se esterilizarán en el autoclave.
Antes de resembrar cultivos líquidos hay que homogeneizarlosmediante la agitación del tubo.

Los cultivos se manipulan a temperatura ambiente del laboratorio. Si están refrigerados hay que atemperarlos antes de utilizarlos.
El asa de siembra se esteriliza por flameado con la llama del mechero Bunsen, antes de tomar la muestra y después de inocularla.
 
Hay que esperar a que el asa se enfríe antes de tocar la muestra paraevitar aerosoles y la muerte de los microorganismos.
Al abrir frascos, tubos o matraces, se debe flamear siempre la boca del tubo de vidrio, antes y después de tomar la muestra.
Los tapones se mantendrán sujetos con el 4o y 5° dedo (anular y meñique) de la mano que manipula el asa, evitando tocar la zona de tapón que está en contacto con el interior del tubo cuando está cerrado.
El tapón no debesoltarse de la mano mientras se manipula el tubo.
Los recipientes se abren sólo cuando es necesario y se mantienen abiertos el tiempo imprescindible para la manipulación de la muestra.
Cuando se abran, se hará con la boca del recipiente dirigida hacia la llama del mechero.
Al efectuar resiembras es conveniente trabajar con cultivos recientes, como máximo de 24 horas de evolución.
Las placasPetri inoculadas se incuban en posición invertida, para evitar que el agua de condensación que pueda haber en la tapa caiga sobre la superficie del agar y produzca un crecimiento confluente de las colonias además de aumentar el riesgo de contaminación.
 
 
1.1- SIEMBRA DEL INÓCULO EN MEDIO LÍQUIDO
Con asa de siembra: se carga el asa con la muestra sólida o líquida, en condiciones de esterilidad y se...