uv vis

Estructura de Macromoléculas

Departamento de Química-Física, Universidad de Granada. OLM

II.3.2. Espectroscopia Ultravioleta/Visible (U/V).

II.3.2.1. Introducción.
La absorción de radiación ultravioleta o visible proviene de la excitación de los
electrones enlazantes y como consecuencia, las longitudes de onda de los picos de absorción
pueden correlacionarse con los tipos de enlacesque existen en las especies en estudio. La
espectroscopia de absorción molecular es por tanto valiosa para la identificación de los grupos
funcionales de una molécula. Sin embargo, son más importantes las aplicaciones de la
espectroscopia de absorción ultravioleta y visible para la determinación cuantitativa de
compuestos que contienen grupos absorbentes o también llamados cromóforos. Dehecho la
aplicación mas generalizada de relevancia biológica es la medida de concentraciones de
proteínas, NADH y ácidos nucleicos, porque en la mayoría de los casos hay una relación
directa y simple entre el número de moléculas presentes y la absorción. No obstante, en
algunos casos la absorción depende notablemente del entorno molecular; así los cambios en el
espectro con cambios de entornopueden interpretarse en términos de procesos tales como
fusión de ácidos nucleicos, interacciones proteína-ligandos (ensayos de actividad enzimática,
enzima-cofactor, activador, inhibidor), etc. El espectro UV/V de un biopolímero es una huella
dactilar y como tal puede usarse en ocasiones para identificarlo. La gran utilidad de tales
medidas radica en la alta sensibilidad, la sencillez de lamedida y el hecho de hacerse en
disolución; aunque no es posible estas medidas en sistemas biológicos intactos, es decir in
vivo, tales como tejidos debido a que esta radiación es fuertemente dispersada.
II.3.2.2. Parámetros de los espectros electrónicos.
Los espectros electrónicos se representan normalmente como una grafica de la
absorbancia o densidad óptica, definida en la tabla II.3.2.I,frente a la longitud de onda de la
radiación incidente, frecuentemente expresada en nm. Dos parámetros caracterizan una
determina da banda espectral, la posición del máximo, λmáx , y su intensidad.
En la tabla II.3.2.I se recogen todos los parámetros que se usan en este tipo de
espectroscopia. Los nombres de los parámetros en la columna de la izquierda responde a la
terminología recomendadapor Analytical Chemistry (Anal. Chem., 1990, 62, 91.). En la figura
II.3.2.1 se representa un esquema que ilustra alguna de las definiciones de la tabla II.3.2.I.

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TABLA II.3.2.I
Términos y símbolos de los parámetros más importantes utilizados en la
espectroscopia electrónica.
ParámetrosaDefinición

Términos
alternativos

Energía (en joules) de la Intensidad de
radiación incidente en el radiación, I, I0
detector, por m2 y por s.
Densidad óptica, D;
P
log 0
extinción, E

Potencia radiante, P, P0
Absorbancia, A

P

log

Transmitancia, T
Longitud de la trayectoria
de la radiación en cm, b

P0
P

Transmisión, T

___

l, d

Absortividad, a

A
; cen g.L-1, b en cm
bc

Coeficiente de
extinción, k

Absortividad molarc, Є

A
; c en mol.L-1, b en cm
bc

Coeficiente de
extinción molar

b

P0

P

Disolución conteniendo
moléculas absorbentes de
la radiación UV/V.

Célula espectrofotométrica
de cuarzo.

Figura II.3.2.1 Atenuación de un haz de radiación por una solución absorbente.

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II.3.2.3. Fundamentos de la espectroscopia electrónica.
Una descripción rigurosa de la espectroscopia de absorción U/V de los estados
electrónicos requiere el uso de conceptos mecanocuánticos tales como la especificación de las
moléculas mediante funciones de onda y el uso del momento dipolar de transición que
determina la...