Validación para la cuantificación de cloridrato de bromhexina

Desarrollo y validación de un método de análisis para la cuantificación del Clorhidrato de Bromhexina.

Valia Vázquez Pita*
Raúl Aguirre
El Clorhidrato de Bromhexina es un agente mucolítico que actúa incrementando las secreciones bronquiales y disminuyendo su viscosidad, dado que fragmenta las fibras de mucopolisacáridos ácidos de la secreción viscosa y adherente del tracto respiratorio [4].Es usado en el tratamiento de las enfermedades del sistema respiratorio de las aves [5]. Frente a la necesidad de nuevos medicamentos para contrarrestar las enfermedades del aparato respiratorio de las aves en el Grupo Empresarial LABIOFAM se desarrolló un nuevo medicamento en forma de polvo que tiene al Clorhidrato de Bromhexina y al Tartrato de Tilosina como sus ingredientes activos, por lo queel objetivo de este trabajo fue desarrollar y validar un método de análisis para el control de calidad.

Materiales y métodos
Desarrollo de la técnica analítica para el control de proceso del Clorhidrato de Bromhexina: se desarrolló, empleando un equipo de marca MLW, una técnica de análisis potenciométrica basada en una valoración con solución de Nitrato de Plata 0.1 N, previo tratamiento dela muestra con electrodo de plata y calomel saturado. La norma de concentración analítica es de 0.9 % a 1.1 %.
Validación del método de análisis desarrollado: se validó la técnica de análisis para la cuantificación del Clorhidrato de Bromhexina por el método potenciométrico. Para esto se realizó el procesamiento estadístico establecido en las normas de validación para métodos de análisis[1-3,6].
Especificidad: se determinó mediante el análisis del patrón, placebo, Tilosina y muestra, donde se debe asegurar que la señal emitida proceda únicamente de la sustancia a analizar sin interferencia de excipientes y otros principios activos.
Linealidad: se valoraron cantidades de analito correspondientes al 0.5 %, 0.6 %, 0.8 %, 1.0 %, 1.2 % y 1.5 %, se realizaron tres réplicas por cadaconcentración y se determinaron los parámetros de linealidad:
a) Expresión de la recta de regresión, cálculo de la pendiente y del intercepto, e interpretación estadística de la regresión según el coeficiente de correlación (r>=0.99) y el coeficiente de determinación (r2> =0.9).
b) El test de linealidad se realizó mediante el coeficiente de variación de los factores respuesta, se determinó la media,la desviación estándar y el coeficiente de variación. Se considera que un coeficiente de variación superior al 5 % indica falta de linealidad.
Se determinó la significación estadística de la varianza de la pendiente y la desviación estándar de la pendiente, cuyo criterio de aceptación expresa que la desviación estándar relativa de la pendiente debe ser menor del 2 % y el límite de confianza de 95% de la pendiente.
c) En el test de proporcionalidad se determina la varianza y la desviación estándar del término independiente para un límite de confianza de 95 % del intercepto.
Exactitud: se verificó a tres niveles de concentración correspondientes al 80 % (bajo), 100 % (declarado) y 120 % (alto). Cada una de las concentraciones se analizó por triplicado. Se realizó el test G de Cochran paradeterminar si el factor concentración tiene influencia en los resultados, donde si Gexp es menor que Gtabulada (P=0.05, k=3, n=3) las varianzas de las tres concentraciones son equivalentes, o lo que es lo mismo, que el factor concentración no influye en la variabilidad de los resultados.
Para hallar si la exactitud es aceptable, se expresan los resultados en forma de por ciento de recuperación yse aplica un test t de Student. Si texp es menor que ttabulada (P=0.05, grados de libertad (g/l n-1), no existen diferencias significativas entre la recuperación media y el 100 %.
Precisión: se realizaron los ensayos de repetibilidad y precisión intermedia.
La repetibilidad se evaluó en diez determinaciones a una muestra al 100 % del analito. Cada muestra se analizó por triplicado y se...