VALIDACION DE UN METODO PARA DETERMINAR ANTIOXIDANTES FENOLICOS EN ALIMENTOS DE RECONSTITUCION INSTANTANEA POR HPLC

TRABAJO

INTEGRADOR
ISO 17025
VALIDACION
METODO PARA LA DETERMINACION DE
ANTIOXIDANTES FENOLICOS EN MEZCLA
DE CEREALES POR HPLC

Expositor : Bach. Januusz Ruiz del Aguila
Fecha: 18 de Septiembre del 2007

1. OBJETIVOS
• Demostrar que la técnica analítica correspondiente a
la norma AOAC: 983.15 Phenolic Antioxidants in fat
and oils es aplicable para el alcance del método

•Aplicar los conocimientos de validación de métodos
,adquiridos en el diplomado.

2. ALCANCE
El presente método de ensayo es aplicable para la
determinación de antioxidantes fenólicos como son
PG, TBHQ, BHA y BHT en alimentos cocidos de
reconstitución instantánea (papilla y enriquecido
lácteo) y mezcla de cereales.
PG

TBHQ

BHA

BHT

3.RESUMEN
El método se lleva a cabo en dos pasos.La extracción de
la grasa de la muestra y la extracción de los compuestos
(antioxidantes) con acetonitrilo saturado.
Precisión del sistema y del método :RSD aceptable de
3.78% y 4.23% respectivamente.

Linealidad del sistema :r = 0,9909 para el PG, r = 0,9884
para el TBHQ, r = 0,9864 para el BHA y r =0,9879 para el
BHT.
Veracidad del método: % Recuperación
PG :101,98%; TBHQ :98,88% ;BHA :101,16% y BHT:
100,86 %, lo cual nos demuestra que el método es veraz
según los criterios de evaluación.

3.RESUMEN
La Robustez del método se evaluó ante la variación de
algunos parámetros como el flujo, la columna, temperatura
del horno, volumen de inyección y filtro de jeringa. Los
resultados obtenidos mostraron
diferencias absolutas
mayores que Smètodo √2 por lo que los valorespropuestos
para estas variables se consideran críticas al no presentar
robustez en el estudio.
La sensibilidad del método : LOD entre 1,05 y 2,11 y valores
de LOQ entre 1,15 y 3,37.

La incertidumbre de la medición para los antioxidantes PG, TBHQ,
BHA y BHT fueron de 4,29; 2,49; 3,87 y 3,36 ug/g (ppm)
respectivamente.

6.PROCESO DE VALIDACION
6.2. DISEÑO DE LOS PARAMETROS DE VALIDACION YEVALUACION ESTADISTICA

6.2. DISEÑO DE LOS PARAMETROS DE VALIDACION Y
EVALUACION ESTADISTICA
ESPECIFICIDAD - SELECTIVIDAD
El análisis se realizará con el estudio de la pureza u homogeneidad del pico
correspondiente a cada antioxidante.
La prueba se realizará mediante una comparación de los cromatogramas
siguientes:
1. Cromatogramas de la solución estándar de antioxidantes fenólicos(PG, TBHQ, BHA y
BHT) en solución de dilución (acetonitrilo y metanol1:1) con sus respectivos espectros
de absorción de los picos eludíos.
2. Cromatograma del blanco de muestra; es decir una muestra de Inkamix sin
presencia de antioxidantes.

la

3. Cromatograma de la muestra de Inkamix (mezcla de cereales) con adición de la
mezcla de estándares con sus respectivos espectros de absorción delos picos eluídos.

6.2. DISEÑO DE LOS PARAMETROS DE VALIDACION Y
EVALUACION ESTADISTICA
6.2.2. Diseño del ensayo para determinar linealidad del sistema y del método
Concentración y número de repeticiones
Mezcla de Estándares
(PG, TBHQ, BHA, BHT)

Muestra con adición.

50 ppm; n=6
70 ppm; n= 6

90 ppm ; n= 4

90 ppm; n=6
110 ppm; n=6

110 ppm ; n=4

130 ppm; n=6
150 ppm; n=6150 ppm ; n=4

Evaluación Estadística:
 Se empleó el paquete estadístico MINITAB para evaluar el modelo de
regresión
 La evaluación estadística comprende en hallar la ecuación de regresión, el
coeficiente de correlación

6.2. DISEÑO DE LOS PARAMETROS DE VALIDACION Y
EVALUACION ESTADISTICA
6.2.3. Diseño del ensayo para determinar precisión del método
DIA 1

Muestra

PapillaDIA 2

Analista 1

Analista 2

Analista 3

Analista 1

Analista 2

Analista 3

n = 15

n = 15

n = 15

n = 15

n = 15

n = 15

Evaluación Estadística
1. Se empleó el diseño de la Norma ISO 5725-2

2. Se verificó los supuestos de distribucion normal
Con el test de
normalidad del residual del Anova y prueba
De homogeneidad de
varianzas con el software del Minitab....