validacion por metodos analiticos

10. MARIÑO

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Página 374

FARM HOSP
Vol. 30. N.° 6, pp. 374-378, 2006

1130-6343/2006/30/6/374
FARMACIA HOSPITALARIA
Copyright © 2006 ARÁN EDICIONES, S. L.

ORIGINAL BREVE

Desarrollo y validación de métodos analíticos para la
cuantificación de antirretrovirales por HPLC
E. L. Mariño, V. Albert, M. S. M. Ferrer, P. Modamio, C. F. Lastra
Unidad de FarmaciaClínica y Farmacoterapia. Departamento de Farmacia y Tecnología Farmacéutica.
Facultad de Farmacia. Universidad de Barcelona

Resumen

Summary

Objetivo: Desarrollo, validación y caracterización de la función del error de tres métodos analíticos mediante la técnica de
cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) para el análisis cuantitativo de ritonavir, saquinavir y abacavir en plasma humano.Método: Se han indicado los reactivos y aparatos empleados,
la preparación de los diferentes estándares de referencia, el procedimiento de extracción desde la matriz biológica y las condiciones
de análisis ensayadas para la puesta a punto de los tres métodos
analíticos. Además, también se han descrito las metodologías de
validación y de obtención de la función del error analítico.Resultados: Los métodos analíticos desarrollados para ritonavir, saquinavir y abacavir en plasma humano fueron selectivos,
lineales (r2 > 0,99), precisos (coeficientes de variación < 15%) y
exactos (errores relativos < 15%) en el rango de concentraciones
seleccionado. La recuperación fue mayor del 95% en todos los
métodos. Los antirretrovirales estudiados fueron estables en las
condiciones ensayadas deacuerdo con la rutina del laboratorio.
La función del error discriminada para cada uno de los métodos
analíticos validados resultó ser lineal en saquinavir (DE = 4,84 +
7,14·10-2C) y abacavir (DE = -1,072 + 3,70·10-2C) y no lineal en
el caso de ritonavir (DE = 39,98 + 2,40·10-5C2).
Conclusiones: Se han desarrollado y posteriormente validado
tres métodos analíticos, encontrándose losparámetros de validación
dentro de las especificaciones y atributos de calidad establecidos. La
función del error de cada uno de los métodos validados puede
emplearse como método de ponderación heteroscedástica en la
estimación de parámetros mediante regresión no lineal en estudios
de farmacocinética clínica de los antirretrovirales ensayados.

Objective: Development, validation and errorcharacterization of three analytical methods, by high performance liquid chromatography (HPLC), for the quantitative analysis of ritonavir,
saquinavir and abacavir in human plasma.
Method: Reagents and instrumentation used, preparation of
different standards, sample extraction procedure from biologic
matrix, and analytical conditions assayed were detailed to set up
three analytical methods. Inaddition, the validation and the determination of analytical error were also described.
Results: The analytical methods developed for ritonavir,
saquinavir and abacavir in human plasma were selective, linear
(r2 > 0.99), precise (coefficients of variation < 15%) and accurate
(relative errors < 15%) over the concentration range selected. The
recovery was more than 95% in all methods. Antiretroviraldrugs
were stable in the storage conditions assayed according to the
routine laboratory. The error function discriminated for each analytical method validated was linear in saquinavir (SD = 4.84 +
7.14·10-2C) and abacavir (SD = -1.072 + 3.70·10-2C), and nonlinear in ritonavir (SD = 39.98 + 2.40·10-5C2).
Conclusions: Three analytical methods were developed and
subsequently validated, withvalidation parameters being within
the specifications and attributes of quality established. The error
function characterized for each validated method can be used as a
heteroscedastic weighting method in the parameter estimation by
non-linear regression analysis in clinical pharmacokinetic studies
of antiretroviral drugs assayed.
Key words: Ritonavir. Saquinavir. Abacavir. HPLC. Human...