Validación de una tecnica para la determinación de carbohidratos

Validación de una técnica determinación de carbohidratos
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colorimétrica

para

la

Carmen Soto, Maribel Cuello, Yusimí Alfonso, Osmir Cabrera y Gustavo Sierra.
Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba.

La adecuada estandarización de un ensayo analítico, seguido de la validación del método y lahomogeneidad de los reactivos químicos y biológicos a lo largo de los diferentes estudios, son elementos imprescindibles para alcanzar óptimos resultados. En este trabajo se seleccionó una metodología para la validación del método analítico empleado en la determinación de ribosa por el método del orcinol y se utilizó una solución estándar de ribosa (0,025 mg/mL). Se realizó un análisis de loscriterios fundamentales de validación: linealidad, precisión, exactitud, sensibilidad, especificidad, límites de detección y robustez. Se comprobó la utilidad de dicho procedimiento y se demostró mediante el diseño experimental y los procedimientos estadísticos empleados que dicho método es lineal (r2>0,98), exacto (Fexp.< Ftab. y texp. < ttab.), preciso (CV ttabla significa que el método analítico noes exacto y que existe un error sistemático por defecto o por exceso que en valor absoluto es  m - x Sensibilidad: En un método analítico sensible, ligeros incrementos de concentración coinciden con incrementos notables de señal o respuesta (5). Los límites de detección y cuantificación se calcularon teóricamente utilizando el valor de la ordenada en el origen obtenida para la recta decalibración en el ensayo de linealidad. Los límites calculados se comprobaron experimentalmente mediante el análisis repetitivo de 10 muestras de dos soluciones preparadas a las concentraciones obtenidas y los resultados fueron evaluados por un Anova de clasificación simple.

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Resultados
En la Tabla 1 se observan los valores obtenidos para el ensayo de determinación decarbohidratos por el

VacciMonitor

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Año 11 No. 3. Julio-Septiembre del 2002

método del orcinol. Los parámetros de linealidad, precisión a concentraciones bajas, medias y altas del analito; además de exactitud y sensibilidad del método, Tabla 1. Resultados de la validación del método. Parámetro Procesamiento estadístico Coeficientes de correlación y determinación Test de linealidadLinealidad

se encuentran dentro de los rangos de aceptación establecidos (5,14).

Resultados r2=0,9964 r = 0,9981 CVf = 4,55 % Sbre=1,06% a = 0,05

Criterios de aceptación r2 = 0,98 R= 0,99 CVf = 5% Sbrel=2% a=0

Test de proporcionalidad IC(a) incluye el 0 IC(a) = (-0,0161; 0,0161) Conc. medias Conc. Altas 2,09% 1,78% 0,89% 0,83% CVRepet< 3% CVReprod < 3%

Precisión

Repetibilidad yReproducibilidad

Coeficientes de variación Test de Anova de clasificación simple

Conc. bajas CVRepet = 2,05% CVReprod = 2,73% Diferencias Fexp = 1,09

no significativas 0,63 0,55

Fexp < Ftab=5,05

Robustez Exactitud

Factorización

Diferencias no significativas para cada factor

Fexp = 1,8 Fexp < F tab = 2,01 LD = 1 µg/mL CV = 0,52 % CV = 3 % LC = 3,3 µg/mL CV = 0,62 %Sensibilidad

Discusión
Al evaluar estadísticamente la linealidad del método analítico validado, se obtuvieron coeficientes de correlación (r) y de determinación (r2) que demuestran que existe regresión entre las variables concentraciones y las respuestas medidas. Para confirmar que dicha regresión era lineal se aplicaron diferentes test de linealidad, considerando el análisis de la varianza (FAexp) eltest más riguroso que corroboró la linealidad de los métodos y del sistema instrumental. De igual forma se comprobó que se cumple la condición de proporcionalidad y el error sistemático de

cada método es despreciable. Por otra parte, el estudio de precisión mostró una buena repetibilidad y reproducibilidad de los resultados de acuerdo con los criterios de aceptación, mientras que los factores...