Validación del método ultravioleta para determinar fosforo en suero


Validación del método ultravioleta para determinar fosforo en suero.

Se presentó la validación de un método espectrofotométrico aplicable en los laboratorios clínicos para la determinaciónanalítica de fosfatos en suero. El método de análisis se fundamentó en la reacción del fosforo con amonio molibdato a pH acido para formar un complejo medible a 340nm. Se evaluaron la especificad yprecisión teniendo en cuenta la robustez del método, linealidad, exactitud y sensibilidad del método. El método analítico resulto ser lineal, preciso y exacto.

Métodos:

La validad del método analíticose realizó con un lote de escalado del juego de reactivos FOSFORO-UV. El juego consta de un monoreactivo: Solución molibdato-UV y la solución de referencia de fosforo 1,60 mmol/L. Se emplearonsolución de referencia de producción nacional, suero control de la firma comercial con valores normales y con valores patológicos y un juego de reactivos fosforo UV de la firma comercial Roche.

Losensayos fueron realizados en un espectrofotómetro UV/Vis Perkin Elmer modelo LAMBDA EZ201 a una longitud de onda de 340 nm. Para el procedimiento analítico se midieron 20 microlitros de muestra dereferencia de fosforo y se añadieron 2 mL de reactivo solución molibdato-UV, se dejó reposar a temperatura ambiente y se leyó contra ensayo blanco reactivo a 340 nm.

Se evaluaron los parámetros deespecificad, linealidad, precisión, robustez, exactitud y sensibilidad.

1. La linealidad se evaluó en el intervalo de concentraciones de interés clínico, lo que equivale a valores del 25 al 150% de lacantidad teórica declarada. Se efectuaron 3 réplicas para cada uno de los puntos de la curva y los resultados se procesaron en SPSS (programa estadístico) Se determinaron además las variablesrelacionadas con la regresión y correlación, la proporcionalidad y el coeficiente de variación del factor de respuesta.
2. La precisión se efectuó para la repetibilidad, con la utilización de 3 valores...