valoracion microbilogica

770. VALORACION MICROBIOLOGICA DE ANTIBIOTICOS
La valoración microbiológica de antibióticos se realiza comparando, en idénticas condiciones de ensayo, la inhibición de la multiplicación de microorganismos sensibles producida por concentraciones conocidas de una Sustancia de referencia frente a la inhibición producida por diluciones del antibiótico que se está valorando. Estos ensayos ponen demanifiesto la verdadera actividad antimicrobiana del producto. En este capítulo se presentan los procedimientos para la valoración de los antibióticos de esta Farmacopea, para los cuales la valoración microbiológica es el método de referencia.
Las Sustancias de referencia empleadas en los ensayos microbiológicos son sustancias cuya potencia (actividad) ha sido determinada con precisión frente unaSustancia de referencia trazable al patrón internacional o a la preparación de referencia internacional correspondiente.
El ensayo debe ser diseñado de forma tal que permita verificar la validez del modelo matemático sobre el que se basa la ecuación del cálculo de potencia. Si se escoge un modelo de líneas paralelas, las dos rectas formadas por logaritmo de dosis y respuestas (o respuestatransformada) correspondientes a la preparación muestra y a la preparación de referencia deben ser paralelas. Asimismo, deben ser lineales en el intervalo de dosis empleado para el cálculo. También ambas rectas deben tener una regresión significativa. Estas condiciones deben verificarse mediante pruebas de validez para una determinada probabilidad, generalmente p=0,05.
Para determinar si un antibióticocumple con los requisitos de potencia especificados en la monografía correspondiente; debe repetirse la valoración y combinarse los resultados estadísticamente hasta lograr la precisión requerida. Esta debe ser tal que los límites de confianza (P=0,95), expresados porcentualmente, se encuentren dentro del intervalo de potencia especificado en la monografía correspondiente:
Se emplean dos métodosgenerales: método de difusión en agar o en placa y método turbidimétrico o en tubo. El primero se basa en la difusión del antibiótico desde un punto de aplicación, a través de una capa de agar inoculado con el microorganismo de ensayo. La difusión origina zonas o halos de inhibición del microorganismo, cuyo tamaño (diámetro) esta en relación con la concentración de antibiótico. El métodoturbidimétrico se efectúa en un medio de cultivo líquido inoculado con un microorganismo de ensayo, al que se le agregan concentraciones crecientes del antibiótico. Luego del período de incubación se determina la turbidez producida por el desarrollo microbiano, la cual esta en función de la concentración del ántibiótico.
Para obtener el intervalo de concentraciones de trabajo, debe realizarse previamenteuna curva dosis-respuesta y aplicar los métodos estadísticos apropiados (ver Cálculos).
Sustancias de referencia y unidades
La potencia de los antibióticos se expresa en Unidades o µg de actividad. En cada caso, la Unidad o µg de actividad antibiótica se establece y define internacionalmente. [NOTA: no se debe asumir que la Unidad debe necesariamente corresponder a los µg (peso) del antibiótico].DILUYENTES Y MEDIOS
Soluciones reguladoras de fosfato y otras soluciones
Las soluciones reguladoras se deben esterilizar luego de ser preparadas y el pH recomendado en cada caso corresponde al determinado luego de su esterilización.
Solución reguladora N° 1 (1%; pH 6,0) -Disolver 2,0 g de fosfato dibásico de potasio y 8,0 g de fosfato monobásico de potasio en 1 litro de agua. Ajustar a pH6,00 ± 0,05 con ácido fosfórico 18 N o hidróxido de potasio 10 N.
Solución reguladora N° 3 (0,1 M; pH 8,0) -Disolver 16,73 g de fosfato dibásico de potasio y 0,523 g de fosfato monobásico de potasio en 1 litro de agua. Ajustar a pH 8,0 ± 0,1 con ácido fosfórico 18 N o hidróxido de potasio 10 N.
Solución reguladora N° 4 (0,1 M; pH 4,5) Disolver 13,61 g de fosfato monobásico de potasio en 1 litro...