Variado

OBJETIVO GENERAL:

❖ Conocer la importancia de la determinación del piruvato en el laboratorio de bioquímica mediante el proceso de glucólisis.






OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

❖ Determinar la presencia de piruvato mediante la fermentación de levadura.
❖ Observar la producción de piruvato mediante cambios de color.PRODUCCIÓN DE PIRUVATO DURANTE LA FERMENTACIÓN

La producción de piruvato durante la fermentación se realiza por una serie de reacciones enzimaticas que involucran que involucran algunos intermediarios. Este proceso se conoce como fermentación o glucólisis.
La reacción total podría considerarse como la transferencia de dos pares de átomos de hidrogeno de la glucosa al NAD+. Los metabolitos de piruvato yacetaldehído se encuentran normalmente en bajas concentraciones, por lo tanto para comprobar su existencia es necesario impedir su transformación.
La piruvato descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas de manera que el piruvato se acumula y su presencia se muestra con la 2, 4- dinitrofenilhidracina.
La Glucólisis:
En la glucólisis, las moléculas de glucosa o de glucógenose degradan a piruvato (o lactato). Si la glucosa es la sustancia de partida de la glucólisis, el beneficio neto es de dos moléculas de ATP por molécula de glucosa consumida.
Si la sustancia inicial es el glucógeno, el beneficio por molécula de glucosa es de tres moléculas de ATP. El contenido celular de NAD+ es suficiente para sólo unos segundos de activación glucolitica máxima.
Por tanto, unprerrequisito de la producción de energía glucolitica es que la NADH libere continuamente sus electrones e hidrógeno a fin de reformar la NAD+. Esta liberación puede producirse de dos modos distintos.
El más ventajoso es la cesión de electrones y protones a la cadena respiratoria mitocondrial, con la consiguiente formación de tres moléculas de ATP por molécula de NADH. Esto exige a su vez unadecuado aporte celular de oxígeno, puesto que la cadena respiratoria es estrictamente aeróbica.
En esta situación, el piruvato formado glucolíticamente es transportado desde el citoplasma hasta la mitocondria para ser convertido en acetilcoenzima A (acetil CoA) y continuar degradándose en el ciclo del ácido cítrico.
Cuando el aporte de oxígeno es inadecuado, por ejemplo durante la realización de unejercicio intenso, o cuando el ritmo glucolítico es alto, parte de la NAD+ es reformada mediante un mecanismo alternativo. Este mecanismo implica la transferencia de electrones e hidrógeno desde la NADH hasta el piruvato (C3H403), que es transformado después en lactato (C3H603). En esta reacción no se regenera ATP en absoluto, pero la NAD+ se vuelve a formar, posibilitando así la producción de ATPmediante el camino glucolítico
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El piruvato es un producto que se sintetiza en el organismo durante el metabolismo de los carbohidratos y las proteínas, se encuentra en muchos alimentos como las manzanas rojas, el queso, la cerveza negra y el vinotinto su dosis visual en humanos es de 30 gramos al día.

MATERIALES Y REACTIVOS
❖ 4 Tubos de ensayo
❖ 2 Tubos de centrifuga
❖ 1 Beaker de400ml
❖ 3 Pipetas de 5 ml
❖ Balanza
❖ Calentador
❖ 2 pinzas para tubos de ensayo
❖ Termómetro
❖ Espátula
REACTIVOS:
❖ Solución de glucosa al 10%
❖ Levadura
❖ Fosfato de sodio bibásico 0.5M
❖ Fosfato de potasio monobásico
❖ Acido tricloroacetico 10%
❖ 2.4- dinitrofenilhidracina saturado HCL 2M
❖ NaOH 10%



NORMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LOS REACTIVOS
ACIDOTRICLOROACETICO:
❖ Corrosivo
❖ Produce graves quemaduras
❖ Evitar contacto con los ojos y la piel y si esto sucede lavar con abundante agua y acudir al medico. [pic]
HIDROXIDO DE SODIO:
➢ Produce quemaduras graves
➢ En caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con agua y acudir al...