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POLITÉCNICO COLOMBIANO JAIME ISAZA CADAVID

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

COMITÉ DE TRABAJOS DE GRADO Y PASANTÍAS

GUÍA PARA LA PLANEACION DE LA PRÁCTICA PROFESIONAL

DATOS GENERALES

DÍA
MES
AÑO
15
Marzo
2013
1. Fecha de presentación:


2. Nombre del proyecto, práctica o Actividad:

3. Descripción:




4. Objetivo:


5. Estrategia Metodológica:

Lainvestigación se llevará a cabo en laboratorio y viveros de CORPOICA, C. I. La Selva, ubicado en el municipio de Rionegro, Vereda Llanogrande, a una altitud de 2120 msnm, temperatura promedio de 17ºC, humedad relativa de 78% y 1850 mm de precipitación anual, correspondiente a la zona de vida bosque muy húmedo montano bajo según la clasificación Holdridge. Se realizarán actividades en laboratorio relacionadascon la preparación y diagnóstico de los hongos entomopatógenos y de vivero, correspondientes a las pruebas de entomopatógenos sobre la plaga.


Actividades de laboratorio
Se realizaran varias actividades en laboratorio para preparar el material necesario para las evaluaciones de los entomopatógenos. Dichas actividades se concentran en evaluar la calidad, pureza y porcentaje de germinación decada hongo a evaluar. Adicionalmente, se preparan las concentraciones requeridas para la prueba experimental contra M. velezangeli.

1. Preparación de la Solución Madre
Se prepara una solución con cada uno de los hongos a evaluar; se toman 25gr del hongo comercial, se disuelven en 125ml de agua desmineralizada estéril y 5 gotas de Tween-80. La solución preparada se pone en agitación durante 1hora. De esta solución madre se hace diluciones seriadas hasta 10-10. 10-10 ¿??

2. Pruebas de calidad
Las pruebas de calidad incluyen evaluaciones de pureza,, porcentaje de germinación y recuento de esporas.

2.1. Prueba de Pureza
La prueba consiste en sembrar por extensión la dilución 10-4, la cual se hace por duplicado en medio PDA. Se evalúa al quinto día, contado las UFC “unidadesformadoras de colonia”.

2.2. Prueba de Germinación
Para esta prueba se cuenta con medio de cultivo PDA acidificado, vertido en cajas de petri. La caja de petri se divide en 5 partes; en cada una de ellas se siembran 5 µl de la dilución 10-4. Estas cajas se dejan en incubación a 25°C durante 24 - 48horas. Pasado este tiempo se evalúa el número de conidias germinadas y no germinadas; para esto, setoma un pedazo del agar de 1-cm de cada cuadricula, se le adiciona 2 gotas de lactofenol y se observa al microscopio a 40X. Se toma como germinada la conidia que presente un crecimiento de al menos el doble de la longitud de la espora; de lo contrario, se toma como no germinada.

2.3. Conteo de esporas
Se hace conteo de esporas con la ayuda de la cámara de Neubauer. Se llena la cámara tomando dela dilución de esporas 10-4; se hacen 6 repeticiones y se saca el promedio de los seis llenados de la cámara para calcular el número de esporas/mililitro. Para el cálculo se aplica la siguiente fórmula:

Esporas/ml: Promedio de esporas x Inverso de la dilución x Factor de corrección de cámara.
Inverso de la dilución= 104
Factor de corrección de la cámara: 104

Con la formula C1V1=C2V2 ycon el conocimiento del total de conidias/ml, se calcula la cantidad a tomar de la solución madre para llevarla a un volumen deseado, en este caso 500ml, a la concentración de 108 esporas/ml, la cual será utilizada en la aplicación. La fórmula C1V1=C2V2, se describe así:

C1: Concentración de conidias contadas en cámara
V1: Volumen solución madre
C2: Concentración a la cual deseada
V2:Volumen final deseado.

A la solución de esporas preparada, se le adiciona Carrier a razón de 1ml/litro de solución, para dispersar las esporas.

Pruebas con entomopatógenos sobre M. velezangeli:
El área experimental estará ubicada en un vivero que CORPOICA disponga para dicho fin. El vivero es recubierto con polisombra con el fin conservar condiciones de humedad y temperatura; el piso es...