Vectores De Clonación Y Expresión

1. Características bioquímicas de un vector de clonación.

Un vector de clonación es aquel que permite insertar material genético externo a un hospedero específico para su expresión y por ende su replicación dentro del mismo.
Existen dos grande grupos en los que se han dividido estos vectores, el primero de ellos con los denominadas vectores de clonación que también se los llama a veces deinserción o vectores de propagación y teóricamente solo incorporan el inserto de interés para su replicación usando la maquinaria del organismo donde es insertado esto generalmente con el fin de tener mayor cantidad de material genético estos vectores deben de cumplir con una serie de características que permita una replicación eficiente y adecuada selección:

1. Un marcador de selección adecuadodebe de estas presente. Esto permita la rápida identificación de las células que contengan el plásmido, aunque algunos plásmidos inicialmente no contaban con este marcador actualmente existen el mercado muchos que pueden conferir resistencia a antibióticos o bien cambian la coloración de la cepas de interés etc.
2. En muchos casos es bueno un marcador de la presencia del gene de interés, con loque podemos seleccionar a las trasformaste con el inserto en el lugar adecuado.
3. El vector debe de contener por lo menos un sitio que sea único para una enzima de restricción de esta manera se asegura que se pueda insertar el material de interés de manera más sencilla, en el caso de los muchos vectores actuales ya contienen dentro de su construcción un sitio de clonación múltiple denominado“polylinker” que contiene muchos sitios de restricción únicos que pueden ser usados para insertar los genes de interés.
4. En el caso de que la clonación sea el fin último, es necesario que se tenga un alto número de copias del vector por célula que permita obtener mayor rendimiento durante la replicación y por lo tanto mayor cantidad de material genético esto además ayuda a utilizar un método deaislamiento más sencillo.
5. Aunque no es un requisito puede ser importante que los vectores de clonación tengan un tamaño pequeño lo que permite que tengan mayor resistencia, tengan una mayor eficiencia de trasformación y replicación.
6. Es necesario que estos vectores tengan un grado de estabilidad demostrado en el hospedero de replicación ya que de lo contrario pueden perderse fácilmentedecreciendo su número de copias.
|Nombre |Tamaño |
|trc |Promotor híbrido que contiene la región regulatoria –35 de trp y la región correspondiente a la caja –10 del promotor |
| |lacUV5 inducible por lactosa y análogos.|
|LacUV5 |Versión mutante del promotor lac si actividad basal es menos sensible a las cantidades AMPc que aumenta con una alta |
| |densidad celular por lo que puede seguir funcionando como inductor. La adición de glucosa al medio permite también |
| |reprimir su actividad si la proteína de interés es toxica para lascélulas. |

La expresión también se puede realizar directamente a nivel cromosómico insertando el gen de interés directamente en el genoma del hospedero con ayuda de enzimas virales. Esto en algunos de los cosas puede permitir que el coste de la manutención de los vectores baje y por lo tanto se cuente con una mayor expresión de proteínas. Esta técnica esmuchas veces usada para la expresión constitutiva de proteínas heterólogas.





4. Ventajas y desventajas del uso de proteínas de fusión durante la expresión de proteínas heterólogas.

En algunos casos los vectores pueden expresar proteínas diferentes a las expresadas por el gen de interés que son denominadas proteínas de fusión estas pueden unirse generalmente al extremo -NH2 o...