vectores virales

138

Revista Argentina de Microbiología (2007) 39:0325-7541
ISSN 138-142
Revista Argentina de Microbiología (2007) 39: 138-142

INFORME BREVE

Diseño y construcción de vectores de transferencia
para la obtención de virus vaccinia
Ankara modificado (MVA) recombinantes
M. F. FERRER1, 2, F. A. ZANETTI1, 2, 3, G. CALAMANTE1*
1

Instituto de Biotecnología, CICVyA, INTA. Casilla de correo25 (B1712WAA) Castelar, Buenos Aires;
2
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Rivadavia 1917
(C1033AAJ) Ciudad de Buenos Aires; 3Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica (ANPCyT),
Córdoba 831 Piso 1 (C1054AAH) Ciudad de Buenos Aires.
*Correspondencia. E-mail: gcalamante@cnia.inta.gov.ar

RESUMEN
El virus vaccinia Ankara modificado (MVA)constituye un buen candidato para el desarrollo de vectores virales de
expresión no replicativos porque no replica en la mayoría de las células de mamíferos. Para la producción de MVA
recombinantes es fundamental disponer de vectores de transferencia que, por recombinación homóloga con el genoma
viral, permitan introducir los genes de interés en regiones no esenciales para la replicación in vitro. Eneste trabajo se
diseñaron y obtuvieron los vectores de transferencia denominados VT-MHA y VT-MTK que portan las regiones correspondientes a las posiciones 1-303 y 608-948 del gen MVA165R y 1-244 y 325-534 del gen MVA086R, respectivamente, las que flanquean un sitio de clonado múltiple para la inserción de los genes foráneos. En dichos vectores se
clonaron los casetes para la expresión de losgenes lac Z o uid A, y la actividad de las enzimas marcadoras
b-galactosidasa y b-glucuronidasa se confirmó in situ. Además, utilizando el vector denominado VT-MTK-GUS, se
obtuvieron y aislaron MVA recombinantes puros que portan y expresan el gen uid A. Los resultados obtenidos constituyen las herramientas básicas para establecer la metodología de obtención de MVA recombinantes, con el propósitode desarrollar localmente vectores virales no replicativos candidatos a vacunas.
Palabras clave: Poxvirus, MVA, vector viral no replicativo

ABSTRACT
Design and construction of transfer vectors in order to obtain recombinant modified vaccinia virus Ankara
(MVA). Modified Vaccinia virus Ankara (MVA) constitutes a good candidate for the development of non-replicative
expression viral vectorsbecause it does not replicate in most of mammalian cells. It is essential, for the production of
recombinant MVA, the availability of transfer vectors which allow the introduction of desired genes into non-essential
regions for in vitro viral replication, by homologous recombination with the viral genome. In the present work, the transfer
vectors named VT-MHA and VT-MTK were designed andobtained. They carried genomic regions corresponding to 1303 and 608-948 positions of the MVA165R gene and 1-244 and 325-534 of the MVA086R gene, respectively, which
flank a multiple cloning site for the insertion of foreign genes. In these vectors, the cassettes for the expression of lac Z
or uid A genes were cloned, and the activity of the marker enzymes b-galactosidase and b-glucuronidase wasconfirmed
in situ. Furthermore, the vector named VT-MTK-GUS was used to obtain and isolate pure recombinant MVA, which
carried and expressed the uid A gene. The results herein constitute the basic tools for establishing the methodology to
obtain recombinant MVA with the purpose of locally developing non-replicative viral vectors as candidate vaccines.
Key words: Poxvirus, MVA, non-replicative viralvector

Los poxvirus se han utilizado eficientemente como
vectores para la expresión in vivo de genes foráneos y
para la construcción de vacunas contra enfermedades
infecciosas (10-12, 14). En particular, el virus vaccinia
Ankara modificado (MVA), que no replica en la mayoría
de las células de mamíferos, es uno de los candidatos
para ser utilizado en el desarrollo de vacunas por ser un...