Veiticuaaatro
Páginas: 21 (5234 palabras)
Publicado: 20 de enero de 2013
55Complejo Nitrato Reductasa en Escherichia colli K-12: Participación de componentes específicos Formiato Deshidrogenasa y Citocromo b1 en la reducción de nitrato
La participación de diferentes componentes en la reducción de nitrato como la formiato deshidrogenasa y el citocromo en E. colli se estudió. La actividad de la formiato deshidrogenasa presente en extractos preparados a partir decélulas nitrato-inducidas de la cepa HfrH fue activa con varios electrones aceptores, incluidos el azul de metileno, metosulfato de fenazina, y bencil biológeno. Algunas mutantes que son incapaces de reducir nitrato poseen niveles bajos o indetectables de la actividad de la formiato deshidrogenasa probada con azul de metileno o metosulfato de fenazina como electrón aceptor. De nueve mutantes, cincoprodujeron gas cuando estaban creciendo anaeróbicamente sin nitrato y se vio la actividad de una formiato deshidrogenasa ligada al bencil biológeno, esto sugiere que diferentes formiato deshidrogenasa participan en los sistemas de nitrato reductasa e hidrigenoliasa fórmica. Las otras cuatro mutantes generaron poco gas cuando crecieron anaeróbicamente en la ausencia de nitrato y carecían de formiatodeshidrogenasa ligada al bencil biológeno así como la actividad ligada al azul de metileno y el metosulfato de fenazina. El citocromo b1 presente en células inducidas con nitrato fue distinguido por sus propiedades espectrales y su control genético de los componentes principales del citocromo b1 en células aerobias y de células en crecimiento anaerobio en ausencia de nitrato. El citocromo b1especifico-nitrato fue completa y rápidamente reducida por formiato 1mM pero no se logro reducir con NAD+ 1mM; el ascorbato redujo solo una parte del citocromo b1 que fue reducido por formiato. Cuando el nitrato fue agregado, el citocromo b1 reducido por ascorbato fue oxidado con una cinética monofásica. Los efectos inhibitorios de heptil-4-hidroxiquinolina-N-óxido sobre la oxidación de citocromo b1 pornitrato no generaron evidencia de que el citocromo nitrato-específico está conformado por dos componentes que poseen diferentes potenciales de reducción pero propiedades espectrales idénticas. A partir de estos estudios concluimos que la reducción de nitrato en E. colli es mediado por operaciones secuenciales de una formiato deshidrogenasa específica, dos componentes específicos de citocromo b1 ynitrato reductasa.
Un número de observaciones indica que la reducción de nitrato en E. colli ocurre principalmente por una ruta que involucra formiato deshidrogenasa, citocromo b1, y nitrato reductasa. Entre los diferentes sustratos que son metabolizados por E. colli, el formiato es el electrón donador más efectivo para la reducción de nitrato en células en crecimiento anaeróbico en lapresencia de nitrato. En tales células, la formiato deshidrogenasa, el citocromo b1, y la nitrato reductasa son inducidas a niveles relativamente altos comparados con aquellos en células que crecen en ausencia de nitrato. Esos tres componentes están presentes en fracciones de membrana y han sido parcialmente purificados como una unidad extraída de células. Finalmente, las mutantes de E. colli que sonincapaces de producir nitrito a partir de nitrato (NR-mutantes) carecen también de nitrato reductasa, formiato deshidrogenasa o combinaciones de esas actividades y citocromo b1.
La propuesta es que la formiato deshidrogenasa y el citocromo b1 son componentes específicos del incremento en el sistema de la reducción del nitrato, a raíz de esto se desprenden otras preguntas sobre la relación de estaruta con otras y el transporte de electrones en E. colli. La formiato deshidrogenasa debe también ser un componente del sistema de hidrogenilasa así como de la formiato oxidasa. Estás múltiples funciones de formiato deshidrogenasa se han reconocido previamente, y han sugerido que al menos dos formiato deshidrogenasas, partícula y soluble, son formadas por E. colli.
La participación de...
La participación de diferentes componentes en la reducción de nitrato como la formiato deshidrogenasa y el citocromo en E. colli se estudió. La actividad de la formiato deshidrogenasa presente en extractos preparados a partir decélulas nitrato-inducidas de la cepa HfrH fue activa con varios electrones aceptores, incluidos el azul de metileno, metosulfato de fenazina, y bencil biológeno. Algunas mutantes que son incapaces de reducir nitrato poseen niveles bajos o indetectables de la actividad de la formiato deshidrogenasa probada con azul de metileno o metosulfato de fenazina como electrón aceptor. De nueve mutantes, cincoprodujeron gas cuando estaban creciendo anaeróbicamente sin nitrato y se vio la actividad de una formiato deshidrogenasa ligada al bencil biológeno, esto sugiere que diferentes formiato deshidrogenasa participan en los sistemas de nitrato reductasa e hidrigenoliasa fórmica. Las otras cuatro mutantes generaron poco gas cuando crecieron anaeróbicamente en la ausencia de nitrato y carecían de formiatodeshidrogenasa ligada al bencil biológeno así como la actividad ligada al azul de metileno y el metosulfato de fenazina. El citocromo b1 presente en células inducidas con nitrato fue distinguido por sus propiedades espectrales y su control genético de los componentes principales del citocromo b1 en células aerobias y de células en crecimiento anaerobio en ausencia de nitrato. El citocromo b1especifico-nitrato fue completa y rápidamente reducida por formiato 1mM pero no se logro reducir con NAD+ 1mM; el ascorbato redujo solo una parte del citocromo b1 que fue reducido por formiato. Cuando el nitrato fue agregado, el citocromo b1 reducido por ascorbato fue oxidado con una cinética monofásica. Los efectos inhibitorios de heptil-4-hidroxiquinolina-N-óxido sobre la oxidación de citocromo b1 pornitrato no generaron evidencia de que el citocromo nitrato-específico está conformado por dos componentes que poseen diferentes potenciales de reducción pero propiedades espectrales idénticas. A partir de estos estudios concluimos que la reducción de nitrato en E. colli es mediado por operaciones secuenciales de una formiato deshidrogenasa específica, dos componentes específicos de citocromo b1 ynitrato reductasa.
Un número de observaciones indica que la reducción de nitrato en E. colli ocurre principalmente por una ruta que involucra formiato deshidrogenasa, citocromo b1, y nitrato reductasa. Entre los diferentes sustratos que son metabolizados por E. colli, el formiato es el electrón donador más efectivo para la reducción de nitrato en células en crecimiento anaeróbico en lapresencia de nitrato. En tales células, la formiato deshidrogenasa, el citocromo b1, y la nitrato reductasa son inducidas a niveles relativamente altos comparados con aquellos en células que crecen en ausencia de nitrato. Esos tres componentes están presentes en fracciones de membrana y han sido parcialmente purificados como una unidad extraída de células. Finalmente, las mutantes de E. colli que sonincapaces de producir nitrito a partir de nitrato (NR-mutantes) carecen también de nitrato reductasa, formiato deshidrogenasa o combinaciones de esas actividades y citocromo b1.
La propuesta es que la formiato deshidrogenasa y el citocromo b1 son componentes específicos del incremento en el sistema de la reducción del nitrato, a raíz de esto se desprenden otras preguntas sobre la relación de estaruta con otras y el transporte de electrones en E. colli. La formiato deshidrogenasa debe también ser un componente del sistema de hidrogenilasa así como de la formiato oxidasa. Estás múltiples funciones de formiato deshidrogenasa se han reconocido previamente, y han sugerido que al menos dos formiato deshidrogenasas, partícula y soluble, son formadas por E. colli.
La participación de...
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