Verificacion De Espectrofotometros

Introducción
Cuando un equipo fotométrico esta calibrado se puede asegurar confiabilidad y exactitud   del mismo. Para que un espectrofotómetro funcione correctamente se debe verificar: la linealidad, la sensibilidad y la calibración.

Linealidad: son pruebas preliminares acerca de la exactitud del método, se realiza un análisis de estándares de pureza conocida que abraca el rango delinealidad deseada y tiene concentraciones en determinados puntos específicos, una vez analizados se grafica la concentración contra la media de los resultados y la linealidad se confirma cuando es posible trazar una línea recta   a través de los datos   puntuales que forma un ángulo de 45° con los ejes y no se desvié en ninguno de los extremos antes de alcanzar el rango de linealidad esperado.Sensibilidad: es la probabilidad de una prueba positiva cuando está presente la enfermedad que la prueba que se le realiza la pueda detectar.

Calibración: es el uso de estándares de concentración conocida que sirven para evaluar el método de análisis. Se realiza una curva tipo   de todos los metabolitos que se van analizar y los parámetros que indican que la curva tipo que se realiza está correcta son:coeficiente de relación, desviación estándar y la regla de la recta.
Resultados
Verificación de calibración y sensibilidad
LONGITUD DE ONDA | ABSORBENCIA |
450 | 0.358 |
460 | 0.415 |
470 | 0.459 |
480 | 0.496 |
490 | 0.556 |
500 | 0.593 |
510 | 0.569 |
520 | 0.501 |
530 | 0.403 |
540 | 0.285 |
550 | 0.184 |
Tabla y grafica 1. Verificación de la calibración ysensibilidad del espectrofotómetro, utilizando una solución de cloruro de cobalto (2.2% en HCl 1%).

Verificación de la linealidad
[mg/dL] | ABSORBENCIA (500nm) | % de error |
26.5 | 0.083 | -83.4 |
53 | 0.169 | -66.2 |
106 | 0.368 | -26.4 |
159 | 0.54 | 8 |
212 | 0.731 | 46.2 |
265 | 0.895 | 79 |
318 | 1.123 | 124.6 |
371 | 1.285 | 157 |
424 | 1.453 | 190.6 |
477 | 1.613 |222.6 |
530 | 1.804 | 260.8 |
Tabla 2. Lecturas de la absorbencia de las diferentes concetraciones de cloruro de cobalto, y su porciento de error.

Grafica 2.0. Linealidad del espectrofotómetro “Spectronic genesys 20”.

Grafica 2.1. Representación del porciento de error de la linealidad de espectrofotómetro “Spectronic genesys 20”.
Conclusiones
El espectrofotómetro mostro una absorbencia de0.569 a 510nm con una solución de cloruro de cobalto, según la literatura la absorbencia máxima que debe tener el cloruro de cobalto es de 0.5 a 510nm. Podemos decir que nuestro espectrofotómetro tiene una sensibilidad adecuada dado que la absorbencia máxima obtenida en la práctica fue muy parecida a la absorbencia máxima conocida según la literatura.
El espectrofotómetro esta calibrado ya quela absorbencia máxima fue parecida a la ya establecida o conocida.
Nuestro aparato tiene linealidad ya que, la absorbencia es directamente proporcional a la magnitud de la concentración, por lo tanto cumple con la Ley de Beer. Se obtuvo una R2=0.9981.

EXTRA:
CONTROL DE LINEALIDAD FOTOMÉTRICA
Método:
La solución de Rojo Congo diluída 1/5 será tomada como la solución madre al 100% (0,060mg/ml) A partir de ésta hacer diluciones para obtener soluciones al 75; 50; 25 y 12,5% (0,045; 0,03; 0,015 y 0,0075 mg/ml respectivamente). Medir las absorbancias de las soluciones al λ óptimo. Finalmente, graficar Abs = f(Cc), considerando como dato el 0%.
Calibración con rojo Congo
* Reactivos requeridos
Solución de Rojo Congo 14 mg/L
HCl 2,5 N
NaOH 2,5 N
* Procedimiento
1) Preparaciónde las formas ácida A y alcalina B del colorante.
Alicuotar con una misma pipeta 5 mL de solución de Rojo Congo 14 mg/L en dos tubos de ensayo rotulados A y B.
Solución A: al tubo A agregarle 20 uL de la solución de HCl 2,5 N
Solución B: al tubo B agregarle 20 uL de la solución de NaOH 2,5 N
Usar una única micropipeta para dispensar los 20 uL.
Las soluciones A y B una vez preparadas son...