Verificacion del metodo cafeina por hplc
Páginas: 32 (7834 palabras)
Publicado: 23 de junio de 2010
INFORME DE VERIFICACIÓN DEL METODO ANALITICO PARA ANALISIS DE CAFEINA EN BEBIDAS ENERGIZANTES
1. OBJETIVO Y ALCANCE DEL MÉTODO
Verificar el desempeño del método analítico AOAC 979.08 "Benzoato, cafeína y sacarina en bebidas soda"- Método por cromatografía. Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemists. 2005 para análisis de cafeína en bebidas energizantes.
2.DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
Reproducibilidad interna: Diferencia entre los resultados de las mediciones del mismo Analito llevadas a cabo bajo condiciones de reproducibilidad interna, por ejemplo condiciones donde los resultados de los ensayos independientes son obtenidos con el mismo método, con idénticas muestras, en el mismo laboratorio, por diferentes operarios, utilizando el mismo equipo,en diferentes tiempos.
Solución sintética: Solución que puede ser analizada sin el aislamiento de los analitos requeridos por muestras de ensayo ordinarias. Esta es, con frecuencia, una solución preparada en el laboratorio disolviendo una cantidad conocida del Analito. A menudo, esta solución no contiene otras sustancias presentes en la solución de ensayo original.
Volumen muerto Vo: es elvolumen total de solvente entre el punto de inyección y el de detección, exceptuando el correspondiente a las partículas de fase estacionaria. Comprende el volumen de la fase móvil puede ocupar entre partículas, entre las partículas y la pared de la columna, en el interior de las tuberías, uniones fritados,etc.
Resolución R: La resolución se calcula por cada par de picos adyacentes como:(t2-t1)
R = ---------------------
½ (w2 – w1)
Donde t2 y t1 corresponden a los tiempos de retención de los picos 2 y1, w2 y w1 a los anchos de picos medidos en su base.
3. REFERENCIAS
Procedimiento operativo para verificación y/o validación de un método analítico PA02-PM-403-P 01
Procedimiento operativo ANALISIS POR HPLC. DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA EN BEBIDASENERGIZANTES PO04-DS-403-P 109
Método AOAC 979.08 "Benzoato, cafeína y sacarina en bebidas soda"- Método por cromatografía. Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemists. 2005
Curso Internacional Precongreso Validación de Métodos analíticos para el laboratorio Químico. Leonardo Merino MSc. Swedish National Food Administration. Asociación Colombiana de Ciencia y Tecnología.Abril 2003.
Decisión 2002/657/CE de la Comisión de 12 de agosto de 2002 por el que se aplica la directiva 96/23/CE del Consejo en cuanto al funcionamiento de los métodos analíticos y la interpretación de resultados.
Introducción a la HPLC Aplicación y práctica. Quattrocchi. 1992
4. ANALITO Y MATRIZ
El analito a evaluar en esta verificación es cafeína en matriz bebidas energizantes.5. PARAMETROS A VERIFICAR O VALIDAR
Establecer las condiciones cromatográficas adecuadas para la separación y cuantificación por HPLC para cafeína en bebidas energizantes.
Determinar los parámetros de verificación del sistema y los del método, tales como linealidad, exactitud, precisión y sensibilidad.
6. DISEÑO EXPERIMENTAL
6.1 Definición del sistema cromatográfico
De acuerdo alas condiciones cromatográficas planteadas en el método analítico AOAC 979.08 "Benzoato, cafeína y sacarina en bebidas soda"- Método por cromatografía. Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemists. 2005 se procede a verificar el desempeño del método en el Laboratorio de Alimentos de INVIMA.
Teniendo como base el método AOAC para resolver posible interferencia de ácidosórbico e interferencias por colorantes se debe ajustar el porcentaje de ácido acético e isopropanol para lo cual se propusieron mediante un diseño experimental factorial, la evaluación de algunos parámetros con el fin de mejorar la separación de cada uno de los analitos.
El método permite evaluar la presencia de benzoato de sodio, sacarina y cafeína, por lo cual se involucra estos analitos...
1. OBJETIVO Y ALCANCE DEL MÉTODO
Verificar el desempeño del método analítico AOAC 979.08 "Benzoato, cafeína y sacarina en bebidas soda"- Método por cromatografía. Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemists. 2005 para análisis de cafeína en bebidas energizantes.
2.DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
Reproducibilidad interna: Diferencia entre los resultados de las mediciones del mismo Analito llevadas a cabo bajo condiciones de reproducibilidad interna, por ejemplo condiciones donde los resultados de los ensayos independientes son obtenidos con el mismo método, con idénticas muestras, en el mismo laboratorio, por diferentes operarios, utilizando el mismo equipo,en diferentes tiempos.
Solución sintética: Solución que puede ser analizada sin el aislamiento de los analitos requeridos por muestras de ensayo ordinarias. Esta es, con frecuencia, una solución preparada en el laboratorio disolviendo una cantidad conocida del Analito. A menudo, esta solución no contiene otras sustancias presentes en la solución de ensayo original.
Volumen muerto Vo: es elvolumen total de solvente entre el punto de inyección y el de detección, exceptuando el correspondiente a las partículas de fase estacionaria. Comprende el volumen de la fase móvil puede ocupar entre partículas, entre las partículas y la pared de la columna, en el interior de las tuberías, uniones fritados,etc.
Resolución R: La resolución se calcula por cada par de picos adyacentes como:(t2-t1)
R = ---------------------
½ (w2 – w1)
Donde t2 y t1 corresponden a los tiempos de retención de los picos 2 y1, w2 y w1 a los anchos de picos medidos en su base.
3. REFERENCIAS
Procedimiento operativo para verificación y/o validación de un método analítico PA02-PM-403-P 01
Procedimiento operativo ANALISIS POR HPLC. DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA EN BEBIDASENERGIZANTES PO04-DS-403-P 109
Método AOAC 979.08 "Benzoato, cafeína y sacarina en bebidas soda"- Método por cromatografía. Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemists. 2005
Curso Internacional Precongreso Validación de Métodos analíticos para el laboratorio Químico. Leonardo Merino MSc. Swedish National Food Administration. Asociación Colombiana de Ciencia y Tecnología.Abril 2003.
Decisión 2002/657/CE de la Comisión de 12 de agosto de 2002 por el que se aplica la directiva 96/23/CE del Consejo en cuanto al funcionamiento de los métodos analíticos y la interpretación de resultados.
Introducción a la HPLC Aplicación y práctica. Quattrocchi. 1992
4. ANALITO Y MATRIZ
El analito a evaluar en esta verificación es cafeína en matriz bebidas energizantes.5. PARAMETROS A VERIFICAR O VALIDAR
Establecer las condiciones cromatográficas adecuadas para la separación y cuantificación por HPLC para cafeína en bebidas energizantes.
Determinar los parámetros de verificación del sistema y los del método, tales como linealidad, exactitud, precisión y sensibilidad.
6. DISEÑO EXPERIMENTAL
6.1 Definición del sistema cromatográfico
De acuerdo alas condiciones cromatográficas planteadas en el método analítico AOAC 979.08 "Benzoato, cafeína y sacarina en bebidas soda"- Método por cromatografía. Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemists. 2005 se procede a verificar el desempeño del método en el Laboratorio de Alimentos de INVIMA.
Teniendo como base el método AOAC para resolver posible interferencia de ácidosórbico e interferencias por colorantes se debe ajustar el porcentaje de ácido acético e isopropanol para lo cual se propusieron mediante un diseño experimental factorial, la evaluación de algunos parámetros con el fin de mejorar la separación de cada uno de los analitos.
El método permite evaluar la presencia de benzoato de sodio, sacarina y cafeína, por lo cual se involucra estos analitos...
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