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Uso de la técnica de PCR para el análisis de polimorfismo


Estudiantes de Bioingeniería, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción, Concepción, Chile.

Introducción
Labiología molecular se encarga de estudiar los aspectos que están relacionados con la información genética que se encuentra dentro de las células. Para realizar estos estudios se han desarrollado diversosmétodos y técnicas que permiten la identificación de genes, su secuenciación, estudio de mutaciones, etc. Estos avances han permitido el auge de lo que se conoce como ingeniería genética, ya que esaquí en los genes, donde se tiene la información que codifica para las proteínas de las células de un organismo. La manipulación de esta información permite crear mejoras genéticas, como también laclonación génica, entre otros.
La caracterización de estos genes puede hacerse mediante la utilización de la técnica de PCR (Polimerase Chain Reaction), ya que su correcto uso permite laidentificación de genes específicos. Esta técnica fue desarrollada por Kary Mullis en 1983 y se basa en una copia exponencial del gen a buscar, por medio de la replicación del ADN. Es decir, se realiza in vitro lareplicación del ADN, pero en este caso, de un solo gen.
Para esto se cuenta con partidores específicos, los cuales se unirán a los extremos del gen a amplificar. El diseño de éstos requiere grancuidado, ya que si no son hechos adecuadamente pueden aparecer inespecificidades indeseadas en la investigación.
Una enzima polimerasa, la cual ayudada por un cofactor Mg2+, permite la unión a lospartidores y la replicación de la hebra de ADN. Esta reacción debe hacerse en un pH adecuado, por lo que se utiliza un buffer que cumple con esta función.
También se debe incluir los dNTPs con loscuales se formarán las copias del gen y el ADN molde, todo esto en agua como solvente de la reacción.
Con todos estos componentes, es necesario realizar ciclos de calor, los cuales permitirán la...