Veterinaria

UNCPBA Facultad de Ciencias Veterinarias Departamento de Ciencias Biológicas

CURSO DE HISTOLOGÍA, EMBRIOLOGIA Y TERATOLOGIA

GUIA DE ESTUDIO:

TECNICAS HISTOLOGICAS
AUTOR M.V.M Sc. RICARDO ALZOLA
PROF. ADJUNTO

AÑO 2001

Se llama técnica histológica a la serie de pasos que han de darse para obtener un preparado observable con el microscopio óptico. Es un proceso largo que abarcadesde el momento en que se toma el material hasta que el preparado puede observarse. PASOS: 1.- Toma de material. 2.- Fijación 3.- Deshidratación 4.- Preparación para la inclusión 5.- Inclusión 6.- Modelado del bloque – catalogación 7.- sección con el micrótomo extendido de los cortes – pegado 8.- Coloraciones: de rutina o especiales

1.- Toma de material:
Introducción: Tratándose de un área deHistología el material ha de ser de un animal sano y normal. Si es posible debe extraerse de un animal vivo y anestesiado, en caso contrario, al menos han de extraerse él o los órganos sanos lo más rápidamente posible después de la muerte. La mayoría de las células consisten en una compleja membrana externa que rodea el protoplasma fluido, mezcla de soluciones de sales, proteínas, hidratos decarbono, lípidos, ácidos orgánicos y enzimas. Si las células no fueron fijadas, mu chas de estas sustancias se perderán por solución simple, por diálisis o por ingurgitación osmótica de las células en el proceso que debe preceder al corte y a la tinción. En la técnica histológica muchos componentes texturales se pierden durante los sucesivos pasos de la misma. Los componentes que perduran son en granmedida moléculas grandes que no se disuelven con facilidad en especial después de aplicar el fijador. Las moléculas grandes, particularmente aquellas que forman complejos con otras moléculas de gran tamaño, para producir compuestos macromoleculares, son las que mejor se conservan en un corte: Ej.: - Acidos nucleicos asociados con una proteína (nucleoproteína) - Proteínas intracelulares delcitoesqueleto que forman complejos con otras proteínas. - Proteínas extracelulares en grandes agregados insolubles asociados con otras moléculas vecinas similares, a través de enlaces cruzados (como sucede en las fibras colágenas) y los fosfolípidos de las membranas. Las proteínas y ácidos nucleicos “pequeños” como el ARN de transferencia en general se pierden durante la preparación de la muestra detejido. Además pueden perderse moléculas grandes, por ej. estas pueden ser hidrolizadas por un pH desfavorable en las soluciones fijadoras. Son ej. de moléculas grandes, que desaparecen durante la fijación de rutina en fijadores acuosos: el glucógeno, proteoglucanos y glucosaminoglucanos. También suelen perderse los lípidos neutros. Al preparar muestras para su inclusión en parafina también se pierdenmoléculas pequeñas solubles o iones. Además y con el mismo propósito, la fijación debe hacerse muy cuidadosamente antes de proceder a la deshidratación. Muestreo: En cuanto la sangre deja de llevar oxígeno a los tejidos y de extraerles el anhídrido carbónico, las enzimas de las células que componen los tejidos comienzan a actuar y se produce la autólisis, las propias estructuras moleculares sondeformadas, que es lo que precisamente se ha de evitar. Los tejidos y órganos se han de extraer considerando las siguientes prioridades: Las glándulas exócrinas y endocrinas lo más rápidamente posible. El páncreas y el riñón deben extraerse no más de 10 a 15 min. post-mortem. Otros órganos tales como intestino delgado y/o grueso, estómago, hígado, se deben extraer no más allá de los 30 min. Losmúsculos esqueléticos, huesos, piel, encéfalo, médula, ganglios nerviosos no deben extraerse más allá de 60 min. postmortem.

Comentario:

Material de necropsia: El examen necrópsico debe ser realizado lo más rápidamente posible después de la muerte, si esto no es posible el animal debe ser colocado a 4° C. o sometido a embalsamamiento por vía arterial.

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Procedimientos generales: Si se...