Vibilidad y conteo celular
Páginas: 7 (1549 palabras)
Publicado: 16 de septiembre de 2012
SEDE MEDELLÍN
VIABILIDAD CELULAR Y RECUENTO EN CAMARA DE NEUBAUER
Isabel Cristina Ortega B.
Estudiante Ingeniería Biológica, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia Sede Medellín
icortegab@unal.edu.co
Mayo 19, 2011
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Resumen
La viabilidad celular es unadeterminación de las células vivas o muertas, en base a una muestra total de células. En este informe se muestran los resultados de la determinación de la concentración y viabilidad de varias muestras de distintas células. Dichas muestras fueron: una línea celular establecida Jurkat que al agregarle azul de tripano solo se teñían las células que presentan daño en la membrana plasmática, y estofue utilizado para diferenciar entre células viables y no viables. Diferenciándolas como: viables sin el colorante y no viables aquellas que fueron teñidas. Se evaluó también concentración y movilidad de espermatozoides de bovino Holstein. Y por último se diferenciaron eritrocitos, leucocitos y plaquetas de una muestra de células sanguíneas, para determinar la concentración de cada uno de estos enun mililitro de sangre. Para la línea celular Jurkat y para las células sanguíneas se usó la cámara de Neubauer para contar e inferir el número de células viables, los resultados de dicho conteo se toman como concentración celular que es expresado en células por mililitro. Y para los espermatozoides de bovino se utilizo la cámara de Makler, que sirve para reconteo rápido de espermatozoides.Palabras Clave: concentración celular, suspensión celular, azul de tripano, cámara de Neubauer.
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1. Introducción
La viabilidad celular es un parámetro de control de calidad muy útil y necesario al realizar cultivos celulares in vitro, ya sea para fines de investigacióno para el mantenimiento de las mismas en bancos de células (bancos de células madre, bancos de esperma, etc.). Esta técnica nos permite monitorear el estado de las células a través del tiempo, o después de someterlas a diferentes tratamientos. Existen varias técnicas para cuantificar la viabilidad celular, las cuales difieren en complejidad y costos de los reactivos y equipos necesarios paraella. El método de viabilidad por azul de tripano es uno de los más sencillos y económicos, se basa en la tinción de las células no viables. [1]
Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión, así como el porcentaje de éstas que son viables.Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, una de ellas es la cámara de contaje celular de la que existe numerosas variantes, entre ellas la cámara de Neubauer hasta equipos automáticos de contaje celular como el "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter. [1]
La cámara de Neubauer (Anexo 4.), es utilizada generalmente para la cuenta de células sanguíneas comoson los eritrocitos (glóbulos rojos) y linfocitos (glóbulos blancos), pero también puede ser utilizada para el conteo de otros tipos celulares. Las áreas grandes indicadas con los números 1, 2, 3 y 4 en el anexo 4 son utilizadas para contar los glóbulos blancos y el área con el número 5 es para contar los glóbulos rojos y plaquetas. Está cámara de contaje se adaptada al microscopio óptico. Lacámara consta de un cubre objetos de cuarzo, con una depresión en el centro, y con una cuadricula marcada. Y con portaobjetos de un grosor mayor a los de uso común. En la parte superior del porta objetos se encuentran cuatro canales longitudinales y uno trasversal central. En la parte superior e inferior del canal trasversal están grabadas dos rejillas, las cuales están a su vez subdivididas. [1]...
VIABILIDAD CELULAR Y RECUENTO EN CAMARA DE NEUBAUER
Isabel Cristina Ortega B.
Estudiante Ingeniería Biológica, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia Sede Medellín
icortegab@unal.edu.co
Mayo 19, 2011
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Resumen
La viabilidad celular es unadeterminación de las células vivas o muertas, en base a una muestra total de células. En este informe se muestran los resultados de la determinación de la concentración y viabilidad de varias muestras de distintas células. Dichas muestras fueron: una línea celular establecida Jurkat que al agregarle azul de tripano solo se teñían las células que presentan daño en la membrana plasmática, y estofue utilizado para diferenciar entre células viables y no viables. Diferenciándolas como: viables sin el colorante y no viables aquellas que fueron teñidas. Se evaluó también concentración y movilidad de espermatozoides de bovino Holstein. Y por último se diferenciaron eritrocitos, leucocitos y plaquetas de una muestra de células sanguíneas, para determinar la concentración de cada uno de estos enun mililitro de sangre. Para la línea celular Jurkat y para las células sanguíneas se usó la cámara de Neubauer para contar e inferir el número de células viables, los resultados de dicho conteo se toman como concentración celular que es expresado en células por mililitro. Y para los espermatozoides de bovino se utilizo la cámara de Makler, que sirve para reconteo rápido de espermatozoides.Palabras Clave: concentración celular, suspensión celular, azul de tripano, cámara de Neubauer.
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1. Introducción
La viabilidad celular es un parámetro de control de calidad muy útil y necesario al realizar cultivos celulares in vitro, ya sea para fines de investigacióno para el mantenimiento de las mismas en bancos de células (bancos de células madre, bancos de esperma, etc.). Esta técnica nos permite monitorear el estado de las células a través del tiempo, o después de someterlas a diferentes tratamientos. Existen varias técnicas para cuantificar la viabilidad celular, las cuales difieren en complejidad y costos de los reactivos y equipos necesarios paraella. El método de viabilidad por azul de tripano es uno de los más sencillos y económicos, se basa en la tinción de las células no viables. [1]
Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión, así como el porcentaje de éstas que son viables.Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, una de ellas es la cámara de contaje celular de la que existe numerosas variantes, entre ellas la cámara de Neubauer hasta equipos automáticos de contaje celular como el "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter. [1]
La cámara de Neubauer (Anexo 4.), es utilizada generalmente para la cuenta de células sanguíneas comoson los eritrocitos (glóbulos rojos) y linfocitos (glóbulos blancos), pero también puede ser utilizada para el conteo de otros tipos celulares. Las áreas grandes indicadas con los números 1, 2, 3 y 4 en el anexo 4 son utilizadas para contar los glóbulos blancos y el área con el número 5 es para contar los glóbulos rojos y plaquetas. Está cámara de contaje se adaptada al microscopio óptico. Lacámara consta de un cubre objetos de cuarzo, con una depresión en el centro, y con una cuadricula marcada. Y con portaobjetos de un grosor mayor a los de uso común. En la parte superior del porta objetos se encuentran cuatro canales longitudinales y uno trasversal central. En la parte superior e inferior del canal trasversal están grabadas dos rejillas, las cuales están a su vez subdivididas. [1]...
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