vitaminas

IMPLEMENTACIÓN DE UN MÉTODO CROMATOGRÁFICO (HPLC/DAD)
PARA LA DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE VITAMINAS
LIPOSOLUBLES EN LECHE

FREYS JULIO SERRANO

UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE QUÍMICA
BUCARAMANGA
2008

IMPLEMENTACIÓN DE UN MÉTODO CROMATOGRÁFICO (HPLC/DAD)
PARA LA DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE VITAMINAS
LIPOSOLUBLES EN LECHE

FREYSJULIO SERRANO

Directores:
ELENA STASHENKO, Química, Ph.D.
JAIRO RENÉ MARTÍNEZ, Químico, Ph.D.

UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE QUÍMICA
BUCARAMANGA
2008

Dedicatoria

A mi esposa, Lady Marcela Castro Rodríguez, el
amor de mi vida,
y a mi hijo, David Santiago, la luz que llegó a mi
vida para iluminar mi camino.

Agradecimientos

A la Dra.ELENA STASHENKO y al profesor JAIRO RENÉ MARTÍNEZ, que
más que profesores han sido dos grandes amigos, a William, Deyanira,
Adriana, Deyny y a todos aquellos que de una u otra intervinieron para hacer
realidad esta meta.

TABLA DE CONTENIDO
Pág.
INTRODUCCIÓN

1

1 ESTADO DEL ARTE

3

1.1 LAS VITAMINAS

3

1.1.1 Generalidades

3

1.1.1.1 Vitamina A

10

1.1.1.2 Vitamina E12

1.1.1.3 Vitamina D

14

1.1.1.4 Vitamina K

15

1.2 LA LECHE

16

1.3 MÉTODOS PARA LA DETERMINACIÓN DE VITAMINAS

18

1.3.1 Cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC)

21

2. CIENCIOMETRÍA

23

2.1 PUBLICACIONES POR AÑOS, PAÍSES Y CATEGORÍAS

23

2.2 PATENTES

24

2.3 PUBLICACIONES O FUENTES NO-FORMALES EN INTERNET

25

2.4 REVISTAS CIENTÍFICAS26

3. DESARROLLO EXPERIMENTAL

30

3.1 MATERIALES Y REACTIVOS

30

3.1.1 Reactivos y solventes

30

3.1.2 Material de referencia certificado

30

3.1.3 Material de laboratorio

31

3.2 MATERIAL LÁCTEO

31

3.3 IMPLEMENTACIÓN DE LA METODOLOGÍA DE ANÁLISIS POR

31

HPLC/DAD PARA LA DETERMINACIÓN SIMULTÁNEA DE
VITAMINAS LIPOSOLUBLES
3.3.1 Método cromatográfico

323.3.1.1 Selección de la longitud de onda

32

3.3.1.2 Selección de la fase móvil

32

3.3.2 Determinación de parámetros de eficiencia de la separación

33

cromatográfica
3.3.3 Determinación de las figuras analíticas de mérito para HPLC

34

3.3.3.1 Evaluación de la repetibilidad del método para tiempos de

34

retención (tR) y áreas
3.3.3.2 Evaluación del rango dinámicolineal (RDL) la linealidad y la

34

sensibilidad del método cromatográfico
3.3.3.3 Determinación de los niveles mínimos de detección (NMD) y

35

de cuantificación (NMC)
3.3.3.4 Selección del método

35

3.3.3.5 Exactitud del método

36

3.3.3.6 Evaluación de la reproducibilidad

38

3.4 DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACIÓN POR HPLC/DAD DE

39

VITAMINAS LIPOSOLUBLES ENMUESTRAS DE LECHE
3.4.1 Determinación

39

3.4.2 Cuantificación

39

4. ANÁLISIS DE RESULTADOS

40

4.1 METODOLOGÍA DE ANÁLISIS PARA LA DETERMINACIÓN

40

SIMULTÁNEA DE VITAMINAS LIPOSOLUBLES POR HPLC/DAD
4.1.1 Método cromatográfico

40

4.1.1.1 Selección de la longitud de onda

40

4.1.1.2 Selección de la fase móvil

41

4.1.2 Parámetros de eficiencia de la separación

444.1.3 Figuras analíticas de mérito para HPLC/DAD

44

4.1.3.1 Evaluación de la repetibilidad del método cromatográfico para

44

tiempos de retención (tR) y áreas

4.1.3.2 Evaluación del RDL y la sensibilidad del método

48

4.1.3.3 Determinación de los niveles mínimos de detección (NMD) y

49

cuantificación (NMC)
4.1.3.4 Selección del método

50

4.1.3.5 Exactitud delmétodo

50

4.1.3.6 Determinación de la reproducibilidad de la extracción

58

4.2 EXTRACCIÓN DE VITAMINAS EN MUESTRAS COMERCIALES

59

4.3 COSTOS DEL ENSAYO

65

5. CONCLUSIONES

67

6. RECOMENDACIONES

68

BIBLIOGRAFÍA

LISTADO DE FIGURAS

Pág.
Figura 1.

Estructura química del retinol

10

Figura 2.

Reacción química primaria de la visión

11

Figura...