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Pfu DNA Polimerasa es una enzima termoestable con un peso molecular de 90 kDa, cataliza la polimerización de nucleótidos en dúplex de DNA en dirección 5’ – 3’, logrando productos de PCR blunt-endsin extremos 3’-dA. Exhibe actividad exonucleasa 3’-5’ (proofreading) que posibilita que la polimerasa corrija los nucleótidos polimerizados erróneamente y carece de actividad exonucleasa 5’-3’.
LasDNA polimerasas son enzimas clave en la replicación del material celular presente en los seres vivos. Catalizan, en presencia de iones de magnesio, la síntesis de DNA en la dirección 5'-3'.
Uno de losavances biotecnológicos más importantes en los 15 años ha sido el desarrollo de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Esta técnica utilizaba originalmente el fragmento Klenow de la DNApolimerasa purificada de E. coli pero, debido a las altas temperaturas necesarias en el proceso para desnaturalizar el DNA, había que reponerla en cada ciclo. El problema se ha resuelto utilizando una DNApolimerasa purifica de un extremófilo hipermófilo, Thermus aquaticus, conocida como Taq polimerasa. Esta enzima es estable a 95 °C y, por lo tanto, es efectiva incluso en la etapa de desnaturalizaciónde la PCR. Además, el uso de la Taq incrementa la especificidad de la reacción ya que el DNA se copia a 72 °C por lo que se evita la hibridación inespecífica de los iniciadores con el DNA.
La Taqpolimerasa presenta el problema de no poseer función correctora (actividad exonucleasa 3'-5') y, como consecuencia, comete más errores en la replicación de E.Coli, que sí posee esta actividad. La DNApolimerasa de Pyrococcus furiosus, denominada Pfu polimerasa, es más termoestable que la Taq y presenta esta actividad correctora (DNA polimerasa de alta fidelidad).


Artículo “High-fidelityamplification using a thermostable DNA polymerase isolated from Pyrococcus furiosus” Lundberg, 1991

Castillo Francisco, Roldán María Dolores, Blasco Rafael, Huertas María José, Caballero Francisco,...