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IESTP DANIEL ALCIDES CARRIÓN


CARRERA PROFESIONAL TÉCNICA EN FARMACIA




GUÍA DE PRÁCTICA


BIOQUÍMICA APLICADA



CÓDIGO : 524-F

CICLO : V

Última
Revisión : Q.F. OSCAR ALBERTO MUGURUZA LÓPEZ













2013

LIMA - PERÚ


CARRERA PROFESIONAL TÉCNICA EN FARMACIA
Asignatura: Bioquímica Aplicada Código: 524-F


PRÁCTICA Nº 1

DETERMINACIÓN DEHEMOGLOBINA EN SANGRE

1.1. Introducción

Los eritrocitos son lisados por acción de un agente tensioactivo presente en el reactivo, liberando su contenido de hemoglobina en la solución.
La hemoglobina liberada es oxidada a metahemoglobina por el ferricianuro, siendo esta última convertida en cianmetahemoglobina por la presencia de cianuro. La absorbancia de la cianmetahemoglobina es medida a540nm, siendo la intensidad del color obtenida, directamente proporcional a la concentración de hemoglobina en la muestra.

1.2. Objetivo:

Determinar los niveles de hemoglobina en sangre mediante un método enzimático.

1.3. Materiales y equipos:

A. Materiales e indumentaria proporcionada por los alumnos:

Los alumnos ingresarán al laboratorio con guardapolvo, cabello recogido enun moño alto, con zapatos cerrados y sin objetos colgantes como pulseras, aretes largos o anillos.
Los ensayos se realizarán con mascarilla, gorro cobertor, guantes descartables y lentes de protección. (de uso personal)
Materiales para toma de muestra: Alcohol medicinal 70%, ligadura, algodón medicinal.

B. Materiales y Equipos:

Materiales
Cantidad
Observación
Adaptador para agujas
1 porgrupo
No se descarta
Adaptador para cubetas de lectura
1
* Se entregara junto con el espectrofotómetro
Agujas para sistema al vacio
1 por grupo

Contenedor de seguridad para agujas
1
* Se encuentra ubicado en el laboratorio
Cubetas de lectura para espectrofotómetro
c.s
* Se entregara junto con el espectrofotómetro
Frasco para eliminar punteras
1

Gradillas para tubos 13 x 100 mm5

Inserto de trabajo
1
Se entregara junto al kit de reactivo
Papel Parafilm
c.s.

Pote con detergente y escobilla
1 c/u
* Se encuentra ubicado en el laboratorio
Piceta con desinfectante
1
Solo para desinfección del área de trabajo
Piceta con agua destilada
2
Lavado de cubetas de lectura
Pipetas graduadas de 5 ml
1
Solo se usara para el reactivo de trabajo
Pipeta graduada de 1ml
1
Solo se usara para el reactivo estándar
Punta de micropipeta 1-200 ul
20
Color amarillo
Propipetas
2

Tubos al vacio c/ anticoag. EDTA
1 por grupo
Con tapa de color LILA
Tubos de ensayo 13 x 100 mm
30

Vaso de precipitado 250 ml
2
Lavado de cubetas de lectura
Equipos
Cantidad
Observación
Espectrofotómetro
1

Micropipeta
1
Para absorber 10 microlitros

C.Reactivos

Para la entrega de reactivos se considerará un aproximado de 5 alumnos por mesa de trabajo.

Reactivos
Cantidad
Observación
Reactivo de hemoglobina
50 ml
Se entrega reactivo de trabajo (1:10 dil.)
Estándar de hemoglobina
2 ml
1 ml por cada grupo de practica (Lectura directa)

1.4.- Procedimiento:

A. Obtención de la muestra por Punción Venosa mediante Sistema alVacío:

1. Verificar que los elementos por utilizar estén listos, y que el paciente se sienta cómodo.
2. Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por encima de la flexión del codo o a 10 cm del codo, sujetar con un medio nudo.
3. El paciente deberá abrir y cerrar la mano durante unos segundos y después la mantendrá cerrada, esto ayudará a visualizar las venas superficiales.
4. Una vezescogida la vena, desinfectarla con una pieza de algodón embebido en etanol al 70% o alcohol absoluto. Dejar evaporar el antiséptico.
5. Se retira el estuche protector de la aguja y éste se enrosca al dispositivo para extracción de sangre al vacío.
6. Se coloca la aguja en dirección paralela a la vena, se perfora la piel haciendo avanzar la aguja entre 0,5 cm y 1 cm en el tejido subcutáneo, se...