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Trabajo Práctico N° 7:
Evaluación del efecto de antimicrobianos DE USO CLINICO sobre cultivos bacterianos. EFECTO BACTERICIDA - BACTERIOSTATICO

Objetivos:

• Demostrar la existencia de antibióticos con distintos espectros de acción.
• Evaluar la acción de diferentes familias de antimicrobianos sobre cultivos bacterianos en crecimiento.

Habilidades esperadas al finalizar el TrabajoPráctico
• Que pueda determinar experimentalmente si un microoganismo es susceptible a un antibiótico determinado.

Cuestionario de orientación:

1. ¿Qué es un agente químico antimicrobiano?
2. ¿Cómo determinaría si un agente antimicrobiano posee efecto bactericida o bacterostático?
3. ¿Cuáles son las características deseables que debe poseer un antimicrobiano de uso clínico? ¿Qué entiende portoxicidad selectiva e índice terapéutico de un antimicrobiano?
4. ¿Cómo clasifica los agentes antimicrobianos de acuerdo a: su toxicidad selectiva, actividad, tipo de microorganismos sobre los cuales actúan. De ejemplos de drogas conocidas de cada grupo.
5. ¿Cuáles son los blancos bacterianos que son afectados por los antibióticos?
6. Enumere los antimicrobianos que inhiben la síntesis de lapared bacteriana e indique sobre un esquema simple los sitios blanco.
7. Sobre un esquema de un hongo levaduriforme indique los sitios de acción de agentes antifúngicos. Ejemplifique.

BibliografIA

Madigan, Martinko, Parker.Brock, Biología de los Microorganismos 8a y 10a Ed. Pearson Prentice Hall.
Prescott, Harley, Klein. Microbiología 5ta. Edición, Mc Graw-Hill Interamericana. Tortora,Funke, Case, Introducción a la Microbiología 9ª Edición Editorial MédicaPanamericana

Desarrollo del trabajo práctico

Primer Día:

➢ Material necesario:

• Cultivos microbianos en caldo tripteína soja: 2 muestras por alumno
• Aislamientos de Escherichia coli
• 1 botella con 50 ml de caldo tripteína soja por mesada
• 4 botellas con TSA por mesada (1 de 150 ml y 3 de 50 ml)• 3 botellas con 150 ml de solución fisiológica por mesada
• 2 paquetes de placas de Petri estériles por mesada
• 4 placas de Petri con TSA por alumno
• 1 pipeta de 10 ml por alumno
• 1 pipeta de 1 o 2 ml por alumno
• 1 pipeta de 0,1 o 0,2 ml por alumno
• 2 pipetas de 1 ml extra por mesada
• 2 pipetas de 0,1-0,2 ml extra por mesada
• Soluciones deantibióticos estériles
• Tubos de ensayo estériles (aprox. 35 por mesada)
• Tubo 0.5 de la escala de McFarland.
• Espátulas de Drigalsky
• Placas de Petri de vidrio con alcohol
• Portaobjetos
• Ansas
• Mecheros

Estimación del efecto de diferentes antimicrobianos sobre cultivos de Escherichia coli en crecimiento.

Usted recibe un cultivo puro de Escherichia coli,el cual debe someter a la acción de diferentes antibióticos, para estimar la actividad bactericida o bacteriostática de cada uno.
Antibióticos a ensayar: ampicilina (AMP), gentamicina (GEN), tetraciclina (TET), cloranfenicol (CHL) y ácido nalidíxico (NAL).

➢ Procedimiento:

1. Fraccionar asépticamente la solución fisiológica en tubos de ensayo estériles, colocando 9,9 ml en 4 tubos y 4,5 mlen otros 6 tubos.
2. Una vez fraccionados los tubos usted recibirá un cultivo de E. coli que se acaba de incubar a 37oC por 30 minutos. Realizar un recuento de viables según el siguiente esquema
[pic]

3. Incubar las placas a 37°C. Este es el recuento inicial PRE-TRATAMIENTO.
4. A continuación, agregar 0,5 ml del antibiótico elegido (volcando asépticamente todo el contenido del tubo tipoeppendorf) al tubo conteniendo 4,5 ml de cultivo, obteniendo una dilución al 1/10 de cada antibiótico. Las concentraciones finales de los antibióticos son: ampicilina 100 µg/ml, gentamicina 40 µg/ml, tetraciclina 30 µg/ml, cloranfenicol 30 µg/ml, ácido nalidíxico 50 µg/ml. Además se debe procesar un tubo sin agrgado de antibiótico que será control.
5. Incubar TODOS los tubos, incluyendo el...