Zavaleta Lamela Luis Brayam

1. OBJETIVOS
1.1 Demostrar la especificidad enzimática de la enzima de glucosa oxidasa sobre la glucosa.


2. INTRODUCCION
La glucosa oxidasa es producida por Penicillium notatum. Esta enzimatiene una afinidad extremadamente marcada por la glucosa. En la presente práctica vamos a demostrar la especificidad de la enzima sobre un sustrato. Para ello, emplearemos glucosa y fructosa; dosisómeros que tiene la formula general C6H12O6.
La Glucosa oxidasa (GOD) cataliza la reacción siguiente:
Glucosa + O2 + H2O2 -----GOD-----→ Ácido Glucónico + H2O2.
El H2O2 uno de los productos de la reacciónpude ser determinado utilizando la enzima Peroxidasa, la misma que al actuar sobre el H2O2 libera Oxigeno, el cual reacciona con la 4-aminofenazona (4-AF) y el fenol, en forma proporcional a laconcentración de H2O2.
La reacción es la siguiente:
2 H2O2 + 4 AF + fenol -----POD----→ Quinona coloreada + 4 H2O.

3. MATERIAL Y MÉTODOS

3.1 Materiales:
Pipetas
Tubos de ensayos
Baño maría
Cocinaeléctrica



3.2. Reactivos.
Solución fructosa.
Solución glucosa.
Solución GOD/POD.

4. PROCEDIMIENTO:
4.1. PREPARACION DE 3 SISTEMAS.
Utilizando la tabla a continuación se debe prepara 3 sistemas.
Favorutilizar pipetas individuales por reactivo utilizado (no contaminar pipetas).

Tabla 01: Sistemas Experimentales:

COMPONENTES Y PROCESO
SISTEMA (Tubos)

1
2
3
Solución de Glucosa 1 g/L (mL)
-
0.1
-Solución de Fructosa 1 g/L (mL)
-
-
0.1
Solución GOD/POD (mL)
2.0
2.0
2.0
Incubar a 37 °C por 10 minutos.
Agua destilada (mL)
3.1
3.0
3.0
Mezclar por inversión


Posteriormente leer mediante elcolorímetro a 420 nm la absorbancia.









5. ESQUEMA.































6. RESULTADO







a) T.2



b) T.3




c) T.1











7. DISCUSION.

La glucosa y la fructuosa son casi igualesporque ambas son azucares simples y tienen la misma composición química, o sea son isómeras, por eso existe una competencia por el sustrato
En los tubos podemos ver que el Tubo 1, no puede unirse...