♥Camio bajo el sol

PRÁCTICA
PRUEBAS BIOQUIMICAS







PRUEBAS BIOQUIMICAS
INTRODUCCION:
El metabolismo es toda una serie de reacciones que ocurren en los seres vivos. Estas reacciones incluyen procesos de obtención de energía como son: la composición de moléculas orgánicas en los quimiótrofos (catabolismo) o la captación de luz para el caso de los fotótrofos, así como de síntesis de materialcelular a partir de nutrientes esenciales (anabolismo).
En el laboratorio es posible conocer las características metabólicas de los microorganismos, inoculando en diferentes medios de cultivo, con sustratos que pueden utilizar como fuente de energía, fuente de carbono y de otros nutrientes esenciales para su crecimiento.
Como se ha observado en prácticas anteriores, algunas bacterias y levadurastienen características coloniales y microscópicas muy similares, lo que no permiten decidir si dos cultivos bacterianos o de levaduras morfológicamente similares pertenecen a una misma especie. Con algunas pruebas bioquímicas es posible su diferenciación e incluso su identificación. Cuando el número de pruebas es suficientemente amplio.
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicosaplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios,los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
En general el microorganismo se cultiva en medios que contienen una sustancia nutritiva específica o sustrato y después de la incubación del cultivo se examina para ver los cambios químicos que hayan ocurrido.

Algunas de las pruebas con las que trabajaremos son: MIO, LIA, VOGUESPOSKAGUER, KLIGER, SIM Y CITRATO DE SIMMONS.


OBJETIVO:
Realizar pruebas bioquímicas en medios de cultivo para sustratos específicos que permitirán demostrar actividades metabólicas de bacterias

Comprender la importancia de las pruebas bioquímicas para caracterización e identificación de estos organismos.
PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA.
1. Preparar los medios de cultivo; MIO, LIA, VOGUESPOSKAGUER, KLIGER, SIM Y CITRATO DE SIMMONS.
OBSERVACION: Cada mesa preparo un medio, la mesa 2 preparo el medio –LIA-
En el medio LIA se puede detectar la producción de la lisina descarboxilasa ya que se produce una reacción coloreada por un cambio en el pH del medio, que contiene como indicador púrpura de bromocresol

FORMULA ( Gramos por Litro)

Peptona de gelatina
5.0
Extracto de levadura3.0
Glucosa 1.0
1.0
Lisina
10.0
Citrato de hierro y amonio
0.5
Tiosulfato de sodio
0.04
Púrpura de bromocresol
0.02
Agar
15.0

INSTRUCCIONES

Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber unos 15minutos. Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución completa. Distribuir y esterilizar a121°C durante 15 minutos. Enfriar en pico de f lauta dejando un fondo vertical apto para la punción.





CALCULOS:



Para la preparación de este; por cada mesa se ocuparan 2 tubos con 6ml c/u por lo tanto se tendrá que preparar 72ml en total.
33 gr de LIA --- 1000ml de agua destilada
X ----72ml


2. Sembrar la bacteria (por el método que requiere cadamedio)
Se sembró E.Coli en cada uno de los medios por el método correspondiente.
PRUEBA
METODO DE SIEMBRA
MIO
Picadura
LIA
Picadura y doble estría
VOGUES POSKAGUER
asada
KLIGER
Picadura
SIM
Picadura
CITRATO DE SIMMONS.
estría








3. Incubar de acuerdo a las características del medio de cultivo.
PRUEBA
TIEMPO DE INCUBACION
MIO
1-2 días
LIA
1-2...