D Eterminación Cuantit Ativa De Azúcares Totales En Un Alimento Por Espectr Ocolorimetría

PRÁCTICAS DE QUÍMICA ANALÍTICA II Práctica 1

D ETERMINACIÓN CUANTIT ATIVA DE AZÚCARES TOTALES EN UN
ALIMENTO POR ESPECTR OCOLORIMETRÍA
A. Introducción La determinación de azúcares presentes en semillas, almendras, frutos y otros tejidos presentes en lo s alimentos es tarea importante para la evaluación de la calidad nutrimental en la química de los alimentos. En una fuente de carbohidratosse pueden identificar azúcares reductores y no reductores, que para su

identificación existen una gama limitada de t écnicas analíticas cuantitativas que no sufran de interferencias por las fibras, proteínas, aminoácidos y otros componentes presentes en los extractos. En la presente práctica se aplicará el método del fenol sulfúrico para determinar el total de azúcares p resentes en productos deorigen agrícola. B. Objetivos Aislar y cuantificar los azúcares totales presentes en un fruto, semilla u hortalizas por espectrocolorimetría de absorción molecular. C. Materiales y reactivos 1 mortero con pistilo 2 vasos de precipitados de 50 m L 1 vaso de precipitados de 60 0 mL 2 pipetas de 2 mL 2 pipetas de 5 mL 14 tubos de ensaye medianos 1 embudo simple 1 tubo cónico Fibra de vidrioSpectronic 20 Bausch and Lomb 1 varilla de vidrio 1 celda de plástico de 1 cm D. Desarrollo experimental 1. Pesar y pulverizar 5 g del producto con auxilio del mortero y el pis tilo. 2. Transfiera el pulverizado a un vaso de precipitados de 50 mL y adicione 5 mL de etanol al 50%, adicione otros 5 m L al mortero para lavar e integre el solvente el extracto de lavado al vaso con el resto de la mezcla.INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA | DEPTO. DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA Semilla o harina d e granos diversos Cítricos Manzana o pera Etanol al 50% Fenol al 5% Ac. Sulfúrico conc. Dextrosa 1 g/100m L Agua destilada

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PRÁCTICAS DE QUÍMICA ANALÍTICA II 3. Mezcle a homogeneidad con au xilio de una varilla de vidrio por 3 minutos y proceda a filtrar en un embudo simple y fibra de vidrio. 4. El filtrado setransfiere a un tubo cónico y centrifugarlo a 5000 rpm por 15 min. 5. Decante el sobrenadante (SN) a un tubo de ensaye seco. 6. Prepare una curva estándar de dextrosa a partir del stock del 1 g/100m L de usando como solvente agua para las concentraciones de 0.005, 0.01, 0.025, 0.05, 0.1, 0.25 y 0.50 g/100 mL en tubos de ensaye medianos. 7. Analice 0.5 mL de cada solución de azúcar, extra ctoetílico (por duplicado) o un testigo*, haciéndola reaccionar con 0.5 mL de fenol al 5%, mezcle a

homogeneidad, adicione con cuidado y por las paredes del tubo 2.5 mL de ácido sulfúrico concentrado, mezcle nuevamente a homogeneidad y anote los cambios observados.
* OJ O: La s eña l d e l te st ig o s e d eb erá r es ta r a c a d a u no d e la s r e sp u es t a s d e la s m ue st ra s.

8. Sometala reacción a un calentamiento suave a 30°C en baño de agua por 20 min. 9. Al finalizar el tiempo de incubación, adicione 5 mL de agua destilada a cada tubo y proceda a determinar el %T a 490 nm para cada una de las muestras las cuales presentarán**.
* * NOT A: E l e sp e ct ro f o t ó m etro d eb erá e sta r e nc end id o co n 3 0 m in d e a nt icip a ció n.

10. Prenda el Espectrofotómetro(Fig.1) y deje estabilizar por 30 minutos. Colóquese la perilla de regulación de del espectrofotómetro a 490 nm . 11. Por medio de la perilla para la regulación a cero, póngase en cero la aguja indicadora en el lado izquierdo de la escala. El porta muestras deberá estar vacío y la fuente luminosa está apagada. 12. Introduzca la solución “B lanco” en el portamuestras y póngase en cero la agujaindicadora del lado derecho de la escala con la perilla de regulación de la luz. La absorbancia (escala roja) deberá mostrarse en cero. 13. Introduzca la solución estándar de referencia para cada concentra ción en el portamuestras y léase la absorbancia. Anote la lectura. 14. Introduzca la solución problema en el portamuestras y léa nse la absorbancia y transmitancia. Anote la lectura y retire la...