m etodos de coloracion microbiologia

PRACTICA Nº 4

METODOS DE COLORACION

I. RESUMEN:

Para observar las bacterias por medio de coloración en esta práctica de laboratorio es necesario, en primer lugar, hacer un frotis de las bacterias y fijarlo. Cuando se parte de un cultivo de un medio sólido, debe depositarse previamente una gota de agua sobre el portaobjetos. Luego se toma con el asa una pequeña parte de la colonia y sedispersa en la gota de agua, realizándose la extensión como en el caso anterior. La fijación tiene por objeto provocar modificaciones en la composición físico-química de la bacteria (coagulación de las proteínas, etc.) de forma que ésta conserve definitivamente una estructura similar a la que tenía en vivo, sin deformarse como consecuencia de los tratamientos a que se verá sometida durante lacoloración en esta práctica nosotros emplearemos la fijación con el calor disipada por el mechero y para ello el frotis se pasa dos o tres veces sobre la llama, con la preparación hacia arriba, para no quemarla. Hay que procurar que el calor nunca sea excesivo, pues se alterarían las estructuras de la bacteria para después llevarla al microscopio e identificar bacterias.

II. INTRODUCCION:

Lamorfología de las bacterias se puede examinar de dos maneras observando los microorganismos vivos sin teñir o bien observando los microorganismos muertos, teñidas con colorantes.
Debido al índice de refracción de los microorganismos, cercano al del agua y a la falta de color de la mayoría de ellos, se hace conveniente colorearlos. Las coloraciones tienen como objeto visualizar la morfología y laestructura interna de las bacterias. Los colorantes son compuestos orgánicos capaces de combinarse con el protoplasma o determinadas estructuras celulares cediéndoles color.
En cambio el mordiente puede definirse como una sustancia que forma un compuesto insoluble con el colorante fijándolo a la estructura coloreada, ejemplo: lugol.
En esta experiencia se llevara a cabo la coloración simple endonde se utiliza un solo colorante ejemplo: azul de metilo, cristal violeta, fucina, etc.
Coloración gram que se utiliza más de un colorante, esta coloración es diferencial ya que permite diferenciar dos grupos de microorganismos.


III. OBJETIVOS:

Comprender la importancia de las coloraciones en la práctica de microbiología.
Desarrollar habilidades en la preparación de frotis y coloración.Identificar los microorganismos Gram positivos y Gram negativos.
Comprender la importancia que tienen estas coloraciones para la caracterización e identificación de las bacterias.


IV. FUNDAMENTO TEORICO:

Coloración o tinción Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de losmicroorganismos y poder realizar la observación en microscopio óptico. Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algún tratamiento previo. De acuerdo a la reacción que ocurre, existen diferentes tipos de coloración:
a) Coloracion simple:
El colorante utilizado sirve solo para denotar lamorfología celular y se utiliza un solo colorante.













b) Coloración Gram:
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en Bacteriología para la visualización de bacterias Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándoseBacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color morado. y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.


Bacterias Escherichia coli (Gram negativas) vistas al microscopio tras ser teñidas con la tinción de Gram.








Bacterias Clostridium perfringens (Gram positive

as).


c) Coloración ácido resistente (Ziehl-Neelsen)...