M Todos De Des Infestaci N De Semillas Para Cultivaci N In Vitro De Orqu Deas Epifitas Del Sur De Brasil

Métodos de des infestación de semillas para cultivación in vitro de orquídeas epifitas del sur de Brasil
Resumen
La des infestación de las semillas de orquídea es necesaria cuando la germinación es presentada in vitro. En tal caso, los cultivos se complementan por una fuente de azúcar y sales para obtener energía y otros requerimientos. Sin embrago, la presencia de azúcar y sales fácilmentepermite el desarrollo de microorganismo no requeridos. Para evitar tal fenómeno, un procedimiento eficiente debe ser hecho como un pre tratamiento de las semillas con sustancias liquidas o gaseosas. En este estudio con varias orquídeas brasileñas, las semillas fueron desinfestadas con soluciones de hipoclorito de sodio conteniendo 0.4% o 0.8% de cloro activo por 5 minutos e hipoclorito de sodio ovapores de formaldehído hasta por 2 horas, este procedimiento es eficaz para tal propósito y por lo que es posible para ser utilizado de forma rutinaria.
Las orquídeas epifitas han sido multiplicadas rutinariamente de semillas, utilizando un cultivo no simbiótico como un método de propagación. La inoculación in vitro es la principal técnica para la micro propagación sin asociación de micorrizassimbióticas. Para el desarrollo correctamente de esta técnica, el azúcar y las sales son requeridas en un medio de cultivo estéril, donde las semillas son libres de microorganismos.
Los embriones de las orquídeas pueden ser cultivados in vitro, usando semillas inmaduras. En tal caso, las semillas son tomadas desde una capsula cerrada para prevenir la contaminación cuando ningún otra inhibición degerminación es encontrada. Este procedimiento no es adecuado para un banco de germoplasma, porque las semillas deben llegar a la madurez y tener bajo contenido en agua para ser almacenadas. Para la germinación, la des infestación es obligatoria antes de la inoculación.
El líquido des infestante debería remover o matar todos los microorganismos de la superficie de las semillas sin dañar losembriones. Para el propósito de des infestación de las semillas de las orquídeas, el hipoclorito de calcio es el más usado, además del peróxido de hidrogeno y el hipoclorito de sodio. El hipoclorito de calcio necesita ser filtrado antes de utilizarlo y no puede ser almacenado por más de 12 horas. El hipoclorito de sodio también necesita estar fresco, ya que ambos son alcalinos y pierde cloro, el ionoxidante activo, el cual captura oxigeno matando los microorganismos aerobios y esporas de hongos, que a su vez, son principalmente responsables de la mayor parte de la contaminación. Estos productos químicos pueden mejorar de alguna manera la germinación en algunas especies por la escarificación de la luz de las semillas.
El hipoclorito de sodio y calcio están prescritos para ser usados en diferentesconcentraciones y tiempos de exposición para desinfestar semillas. A pesar de eso, alguna contaminación puede aparecer debido a las grietas pequeñas en la superficie de las semillas que pueden mantener algunas esporas. Aplicando vapores de hipoclorito de sodio de 5 a 30 minutos pueden solucionar este problema, permitiendo una des infestación completa.
En el intento de alcanzar un método eficientede inoculación para varias semillas de orquídeas epifitas brasileñas, cuatro procedimientos fueron ideados: dos con líquido (0.4% y 0.8% de cloro activo), y dos con sustancias gaseosas (5.5% de hipoclorito de sodio y 99% de vapores de formaldehído).
MATERIAL Y METODOS
Bifrenaria inodora Lindl., Brassavola tuberculata Hook., Cattleya bicolor Lindl., C. intermedia R.Grah, C. intermedia var. pallidaLindl., Encyclia pygmeae (Hook.) Dressler, Epidendrum fulgens A.Brongn., Laelia purpurata Lindl. & Paxt, Miltonia regnelli Reichb., Oncidium pumicum Lindl., Pleurothallis glumacea Lindl. Se obtuvieron de los rodales nativos de las regiones del norte y del este del Rio Grande do Sul Estado, Brasil, en 1999 y 2000. Las capsulas maduras fueron deshidratadas y almacenadas en 5°C ± 1°C, en el...