M TODOS DE LABORATORIO EN VIROLOG A1

MÉTODOS DE
LABORATORIO
EN VIROLOGÍA

Métodos de laboratorio en
virología
El laboratorio de virología requiere
una alta especialización, en
instrumental, técnicas y
personal, que no está disponible
en muchos centros.

MÉTODOS DE LABORATORIO
EN VIROLOGÍA
• El diagnóstico vírico puede ser realizado
por métodos de:
• Detección directa de los virus.
• Demostración de la existencia de Ac
contraellos.

MÉTODOS DE LABORATORIO
EN VIROLOGÍA
• Detección directa
– Observación al ME
– Cultivo celular y estudio de lesiones
citopáticas.
– Demostración de la presencia del genoma
viral por técnicas de biología molecular.

• El estudio de los Ac contra los antígenos
víricos se hace mediante técnicas
serológicas.

TOMA DE MUESTRAS
• Es un proceso clave.
• Las muestras recomendadas para el aislamientode los distintos virus son:
–
–
–
–
–

Adenovirus: hisopo faríngeo, conjuntival, orina,..
Herpes simple: líquido vesicular, hisopo faríngeo.
Varicela: líquido vesicular, LCR
Citomegalovirus: orina, sangre, bucal, biopsias.
Enterovirus: Heces, LCR

TOMA DE MUESTRAS
– Rubeola: hisopo faríngeo y nasal, LCR, orina.
– Influenza: hisopo faríngeo.
– V. respiratorio sincitial: hisopo faríngeo.
–Sarampión: sangre, hisopo faríngeo, orina.
– Parainfluenza: hisopo faríngeo.
– Parotiditis: hisopo bucal, LCR, orina.

TOMA DE MUESTRAS
• Hay que tener en cuenta la fase de la
enfermedad en la que se encuentra el
paciente, y saber qué podemos encontrar
en esa fase en concreto.
• Sólo puede intentarse el aislamiento de
un virus en la fase aguda de la
enfermedad.
• Pasada ésta se recomienda el diagnósticoserológico.

DIAGNÓSTICO VIRAL
ETAPA

PRESENCIA VIRUS PRESENCIA Ac

Incubación

Raramente

No

Prodrómica

Ocasionalmente

No

Aguda

Frecuentemente

Frecuentemente

Recuperación

Raramente

Generalmente

Convalecencia

Muy raramente

Generalmente

TOMA DE MUESTRAS
• Los medios más idóneos para
transporte de las muestras son:

el

– Medio de Eagle con 2% de suero fetal
de ternera.
– Mediocomercial “VirTran”

TOMA DE MUESTRAS
• Las muestras deben mantenerse refrigeradas
durante su transporte.
• Cuando sean pocas horas basta con un termo o
una bandeja con hielo (4ºC)
• Para más horas, si es posible se usará nieve
carbónica.
• Excepciones: cytomegalovirus(CMV), virus de la
varicela (VVZ) y virus respiratorio sincitial (RSV):
no deben congelarse.

MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA
Aplicaciones

• Envirología, la ME tiene un papel
insustituible cuando se precisa un
diagnóstico inmediato, cuando se trata de
virus para los que no hay otro método
alternativo y cuando se trata de un agente
completamente “insospechado”.

MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA
Aplicaciones

• En el caso de la viruela:

– La ME es el método de diagnóstico de
elección por su rapidez y porque la imagen
del virus es inconfundible.
–La gravedad de la infección, sobre todo en el
estado actual, en que se considera
erradicada, hace que cualquier caso
sospechoso
de
viruela
deba
ser
diagnosticado con la mayor rapidez.

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
• En diarreas por rotavirus: en su fase
aguda se eliminan de forma masiva virus
por las heces y se pueden visualizar por
ME.
• El fuerte tropismo de los rotavirus por los
enterocitosdificulta su aislamiento en los
cultivos celulares.

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
• En el caso del HIV, la tinción negativa no
sirve. Se suele buscar con MEB
combinado con técnicas inmunológicas.
• La hepatitis E, también se diagnostica por
ME en heces, así como otros virus
incultivables,
como
los
astrovirus,
calicivirus y el virus de Norwalk.

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
• En virología, la técnica demicroscopía
electrónica más empleada es la tinción
negativa en microscopía de transmisión
(TEM). En ocasiones también se utiliza la
ME de barrido (MEB o SEM)
La caracterización morfológica de los
virus comprende el estudio de la
envoltura, el tamaño, la simetría y el
número de capsómeros.

MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
Tinción negativa
• Consiste en que la muestra, unida a un...