P 7 Cinetica Enzimatica


UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHOMANN

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA DE INGENIERIA PESQUERA



PRACTICA N°6

CINETICA ENZIMATICA



CURSO: LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PROFESOR (A):

ALUMNA: JENRI EBER CALLISAYA TICAHUANCA

CODIGO: 2011-107047

FECHA DE ENTREGA: 27/10/14


TACNA-PERU
2014



I. INTRODUCCION
Las enzimas en su mayoría son de naturalezaproteica que catalizan las reacciones químicas en los seres vivos. Catalizadores son sustancias que, sin consumirse en una reacción, aumentan su velocidad. Las enzimas no hacen factibles las reacciones imposibles sino que, sencillamente, aceleran las que tendrían lugar de manera espontánea. Gracias a ellas tienen lugar, en condiciones fisiológicas, reacciones que, sin catalizador, requeriríancondiciones extremas de presión, temperatura o de pH. Prácticamente todas las reacciones químicas que tienen lugar en los seres vivos están catalizadas por enzimas. La sustancia sobre la que actúa la enzima se llama sustrato. El sustrato se une a una región concreta de la enzima, denominada centro activo.
La mayoría de las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de unas pocasdécimas por encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar drásticamente la actividad enzimática. Por este motivo, los seres vivos han desarrollado sistemas más o menos complejos para mantener estable el pH intracelular Así, la pepsina gástrica tiene un pH óptimo de 2 y la tripsina pancreática lo tiene a pH 7,8.
Los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas. Como regla general, unincremento de 10 en la temperatura duplica la velocidad de la reacción. Las reacciones catalizadas por enzimas también siguen esta pauta. Sin embargo, al ser proteínas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar. La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima. Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reacción debido a latemperatura es contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica debida a la desnaturalización térmica, y la actividad enzimática decrece rápidamente hasta anularse.
Otros factores que afectan la actividad enzimática son la concentración de sustrato, la concentración de enzima e inhibidores.




OBJETIVOS:
Demostrar la acción de la pepsina sobre la albúmina
Determinar cómo afecta la temperatura,el pH, la concentración de enzima y la concentración de sustrato a la actividad de la pepsina

II. MATERIALES Y METODOS
Solución de albúmina 1%
Ácido clorhídrico 1N
Carbonato de sodio al 10%
Pepsina al 1%
Papel indicador de pH
Hielo
Baño María
Pipetas
Tubos de ensayo
Gradillas
Espectrofotómetro
Vaso de precipitados

II.1. METODOLOGIA:


A. EFECTO DEL pH

a) Fundamento
La actividad de unaenzima es máxima a un determinado pH; por debajo o por encima de este la actividad disminuye.


b) Procedimiento:
Preparar 5 tubos enumerados de acuerdo a la siguiente tabla:

Reactivos
Tubo 1
(ml)
Tubo 2
(ml)
Tubo 3
(ml)
Tubo 4
(ml)
Tubo 5
(ml)
Sol, de albúmina
2.50
2.50
2.50
2.50
2.50
HCl 1N
1.00
0.25
-
-
-
NaCO3 10%
-
-
-
0.25
1.00
Agua destilada
-
0.75
1.00
0.75
-

Llevar los 5 tubos a baño Maríay pre incubar a 37°C por 5 minutos
Luego añadir a cada tubo 1.5 ml de solución de pepsina al 1%
Continuar la incubación de los 5 tubos a la misma temperatura

c) Resultados:
Observar cuidadosamente los tubos y anotar el grado de turbidez en la siguiente tabla:











(*) Expresado por medio de cruces, más turbidez más cruces
(**) Expresado como el inverso del número de cruces

B. EFECTODE LA TEMPERATURA

a) Fundamento
Una reacción enzimática se ve favorecida por el aumento gradual dela temperatura; las moléculas de la reacción adquieren progresivamente una mayor energía cinética favoreciendo su interacción. Este aumento solo es hasta cierto límite ya que a partir de él se ve afectada la estructura de la enzima
b) Procedimiento
Preparar 5 tubos de acuerdo a la siguiente...