S Pp Prot

Sección 1

Xómetl Ruíz Diana Iris
Castro Pazos Juan Maximiliano
Sección 1

Instituto politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias BiológicasDepartamento de Bioquímica
Curso Experimental de bioquímica general
Reporte práctica no.1 “Determinación del grupo amino terminal de la hemoglobina; Método deSanger”

INTRODUCCIÓN
El método de Sanger utiliza el reactivo 2,4-dinitrrofluorobenceno, que forma un derivado dinitrofenilo (DNP) amarillo con los grupos amino terminales sin cortar ningúnenlace peptídico.
Cuando la proteína se hidroliza posteriormente para cortar los enlaces peptídicos, el aminoácido N-terminal retiene su marca DNP y puede identificarse separando los productos de lahidrolisis mediante una cromatografía. Sanger observó que algunos DNP derivados de los aminoácidos eran inestables frente a la hidrólisis, por lo que este paso debía acortarse. Comparando los resultadosobtenidos con tiempos de hidrólisis cortos y largos, Sanger observó manchas amarillas adicionales que correspondían a dipéptidos o a otros péptidos pequeños con sus enlaces peptídicos intactos.Entonces pudo aislar los dipéptidos e identificar el segundo residuo. Sanger reconoció que determinando las secuencias de péptidos pequeños que superponían, obtenidos de una proteína hidrolizadaparcialmente, podía hallarse la secuencia de la proteína intacta.

OBJETIVOS
* El alumno utilizará el método de Sanger para identificar los aminoácidos que contienen el grupo alfa-amino terminall de lascadenas de la molécula de hemoglobina.
Resultados:
Cromatografía
Figura 1. Cromatograma: De izquierda a derecha : Problema, DNFB, DNF-Phel, DNF- Val, DNF- Asp, DNF-Ala

Figura 2. Esquemarepresentativo del Cromatograma
DNF-val
DNF-val
DNF-Phe
DNF-Phe
DNFB
DNFB
Problema
Problema

DNF-ala
DNF-ala
DNF-asp
DNF-asp

Tabla- 1 Muestra los Rf calculados en base a los resultados...