T CNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA

TÉCNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA (IF)

La inmunofluorescencia es una técnica utilizada para visualizar la distribución de una proteína o antígeno específico en células o secciones de tejidoutilizando la especificidad de los anticuerpos por su antígeno para dirigir marcadores fluorescentes a las biomoléculas dianas de forma específica. Es una prueba de diagnóstico serológico que tiene dosvariedades principales:
a) Inmunofluorescencia directa (IF) aplicada fundamentalmente a la detección de antígenos en una muestra clínica
b) Inmunofluorescencia indirecta (IFI) aplicada a la detección deanticuerpos específicos en el suero del paciente frente a un determinado antígeno o a la detección de un antígeno en una muestra clínica.
- Inmunofluorescencia directa: sobre un porta objetosdepositamos una muestra en la que buscamos la presencia de un determinado antígeno. Añadimos un suero específico del antígeno problema marcado con isotiocinato de fluoresceína (conjugado). Si el antígenoproblema se encuentra presente en la muestra, se une el conjugado. En caso contrario el conjugado se elimina con un lavado del porta.
- Inmunofluorescencia indirecta: sobre un porta objetos que llevapegado un antígeno conocido, añadimos el suero problema. Si éste contiene anticuerpos específicos, se unen al antígeno. Los anticuerpos del suero no específicos del antígeno del porta se eliminan medianteun lavado. Posteriormente se añade un suero anti-inmunoglobulina humana marcada con isotiocianato de fluoresceína (conjugado). El conjugado se une a los anticuerpos específicos o se elimina mediantelavado había anticuerpos específicos en el suero.
La lectura de ambas modalidades de IF se hace con un microscopio de fluorescencia cuya luz excita al isotiocianato de fluoresceína haciendo que emitaluz fluorescente de color verde. La observación de luz verde fluorescente “tiñendo” un objeto del porta indica la presencia del antígeno en la muestra o de anticuerpos específicos en el suero, según...