x fragil

ANTECEDENTES: El síndrome X frágil (FXS) es un trinucleótido-
repetir la enfermedad causada por la expansión de CGG
las secuencias en el 5? región no traducida del gen FMR1
(X frágil retraso mental 1) genes. Diagnósticos moleculares
de FXS y otros trastornos emergentes FMR1 típicamente
se basan en pruebas 2, PCR y transferencia de Southern, sin embargo,
rendimiento o rendimiento delimitación de éstos
métodos actualmente limitan las pruebas de rutina.
MÉTODOS: Se evaluaron un nuevo gen FMR1 específica
La tecnología de PCR con las plantillas de ADN de 20 líneas de células
y 146 cegados muestras clínicas. La repetición CGG
número se determinó por el fragmento de PCR de tamaño
amplificados con electroforesis capilar, y los resultados
se compararon con los de FMR1 transferenciaSouthern
análisis con las mismas muestras.
RESULTADOS: La PCR FMR1 detectado con precisión fullmutation
alelos de hasta al menos 1300 repeticiones CGG y
que consiste en? 99% carácter GC. Todas las categorías de alelos
detectado por Southern Blot, incluyendo 66 muestras
con mutaciones completas, también fueron identificados por la
FMR1 PCR para cada una de las 146 muestras clínicas. Porquetodos los alelos con mutación completa en muestras de heterocigotos
hembras fueron detectados por la PCR, cigosidad alelo
se reconcilió en cada caso. Los reactivos de PCR también
detectó una fracción de masa 1% de un alelo 940-CGG en un
de fondo 99% 23-CGG-alelo aproximadamente un 5 -
veces mayor sensibilidad que la obtenida con el sur
Blot.
CONCLUSIONES: La novedosa tecnología PCR conprecisión
clasificar el espectro de alelos FMR1, incluyendo
alelos que antes se consideraban demasiado grandes para amplificar;
reproducible detectar alelos de baja abundancia plena mutación;
y homozygosity inferir correctamente en muestras de mujeres,
lo que reduce considerablemente la necesidad de reflexing muestra
hasta el sur de secante.
© 2009 American Association for Clinical ChemistrySíndrome del cromosoma X frágil (FXS), 4 la forma más común de
heredado discapacidad intelectual y genética conocida
causa del autismo, fue una de las primeras enfermedades humanas a
estar vinculada a una expansión de repeticiones de tripletes de nucleótidos
(1-4). FXS es ​​causado por la expansión de la repetición CGG
secuencia situado en la 5? región no traducida de la
FMR1 (retraso mental Xfrágil 1) Gen (2). Las personas
con "normal" (? 45 repeticiones CGG) o intermedio
(45-54 repeticiones CGG) alelos FMR1 son actualmente
piensa que es asintomático para trastornos asociados
con el gen FMR1, sin embargo, los individuos que son portadores
de un alelo premutación (55-200 repeticiones CGG) puede
desarrollar frágil X asociada a temblor / ataxia síndrome
(5) o X frágil asociada ainsuficiencia ovárica primaria
(6-8), mientras que los individuos con el FMR1 completo
mutación (? 200 repeticiones CGG) tienen típicamente FXS (9).
Nada menos que 1,5? 106 personas en los EE.UU. se cree
a estar en riesgo de al menos un trastorno FMR1 (10). Por lo tanto,
estas enfermedades son clínicamente importantes y afectan a un
amplia gama de poblaciones y edades.
Actualmente, lamayoría de las pruebas de diagnóstico paradigmas para
Trastornos FMR1 se basan en la PCR con la resolución por tamaño
electroforesis capilar (CE), electroforesis en gel de agarosa
(AGE), o la página de resolución de tamaño para el
detección de hasta 100-150CGGrepeats. FMR1 Sur
El análisis de transferencia se utiliza tanto para caracterizar muestras
con números de CGG repite demasiado grande paraamplificar por
la PCR y para determinar el estado de metilación de la
gen (11). Desafortunadamente, este flujo de trabajo es costoso, se
tiempo y mano de obra intensiva y requiere grandes cantidades de
ADN genómico (gDNA), haciéndolo inadecuado para
mayores volúmenes de prueba o cribado de población. La
1 Investigación de Diagnóstico y Desarrollo de Tecnología, Asuragen, Inc., Austin, TX;...