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CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

OBJETIVOS
a) Conocer la técnica de cromatografía en
columna, sus características y los factores que
en ella intervienen.
b) Utilizar la cromatografía en columna para la
separación de mezclas de compuestos
orgánicos.
c) Controlar por cromatografía en capa fina la
separación de una mezcla de compuestos por
cromatografía en columna.

ANTECEDENTES
a) Cromatografía encolumna y capa fina.
Características y aplicaciones.
b) Cromatografía de adsorción y de partición o
reparto.
c) Selección de eluyentes para la separación de
compuestos por cromatografía en columna.
d) Técnicas de separación cromatográfica por
elución, por adsorción y por desplazamiento.
e) Eluyentes y adsorbentes para cromatografía en
columna y capa fina. Factores que influyen en la
separación porcromatografía en columna.

INFORMACION
a) La cromatografía en capa fina es una técnica para
determinar el número de componentes de una mezcla
y como una prueba preliminar para realizar una
cromatografía en columna, entre otros.
b) El proceso de cromatografía en columna se controla
por cromatografía en capa fina, de tal manera que se
puede separar cada componente de la mezcla.
c) La cromatografía encolumna se usa para separar
grandes cantidades de material: >100 mg. El proceso
de cromatografía consta de una fase móvil (eluyente) y
una fase estacionaria (adsorbente), los cuales
dependen de las sustancias.

MATERIAL POR EQUIPO DE 2 ALUMNOS

SUSTANCIAS Y REACTIVOS
• Silica gel o alumina para columna (de acuerdo
al experimento a realizar)
• Sílica gel para cromatografía en capa fina.
• Acetatode etilo
• Hexano.
• Antraceno grado técnico
• Colorante comercial de alimentos

EXPERIMENTO 1. PURIFICACIÓN DE ÁCIDO BENZOICO
Se le proporcionará 0.5 g de una mezcla sólida de ácido benzoico
contaminado con azul de metileno, los cuales se separan por
cromatografía en columna. Para empacar la columna sujétela en el
soporte con las pinzas. Engrase ligeramente la llave y mantenga la
posición decerrado. Introduzca hasta el fondo un pequeño pedazo
de algodón ayudándose con la varilla de vidrio, agregue 10 mL de
eluyente (nota 1) y presione suavemente el algodón para que quede
bien colocado y sin burbujas (nota 2).
Prepare una suspensión de 10 g de Sílicagel para columna en 50 mL de
eluyente y agite por 5 min. hasta eliminar las burbujas de aire. A
través del embudo de vidrio vierta laCromatografía en columna suspensión en la columna golpeando
ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme
(Figura 1)

Abra la llave para eliminar el exceso de disolvente
teniendo cuidado de no dejar la sílica gel sin
disolvente (nota 3). En un vaso de precipitado de
150 mL disuelva la mezcla problema con la
mínima cantidad de eluyente (5 mL), ayudándose
con el agitador, viértala concuidado para que
quede distribuida uniformemente encima de la
superficie de sílica gel. Abra la llave para colectar
el disolvente y se adsorba la muestra aplicada
(cuidando que no se seque la columna), eluya la
muestra.

Colecte fracciones de 8 mL en los frascos viales y verifique la
separación haciendo cromatoplacas (nota 4 y 5) de cada una
de las fracciones usando una muestra testigo como seindica
en la figura. Eluya las cromatoplacas en mezcla de hexanoacetato de etilo (2:1) y observe en cuales fracciones hay
presencia del compuesto separado (Figura
2). En cada cromatoplaca observe el cambio de la coloración de
la mancha del producto principal (a menor concentración
menor intensidad de color). La elución y separación termina
en el momento que no se observa en la cromatoplaca
presencia delproducto separado. En un matraz reúna las
fracciones que contienen producto.
Separe el eluyente mediante una destilación simple y calcule el
rendimiento de la sustancia recuperada.

EXPERIMENTO 2. PURIFICACIÓN DE ANTRACENO
GRADO TÉCNICO
Pesar 0.5 g de antraceno grado técnico. Para empacar la columna sujétela en el
soporte con las pinzas. Engrase ligeramente la llave y mantenga la posición de...