actividad catalitica de la amilasa salival

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA-SEDE MEDELLIN
PRACTICA Nº 2. EXTRACCION DE LA TIROSINASA Y DETERMINACION DE SU ACTIVIDAD EN ALGUNOS VEGETALES

Resumen
La amilasa salival es la enzima digestiva presente en la boca, cataliza el rompimiento hidrolítico de los enlaces α-1,4 glicosídicos de la amilosa del almidón.
Se determinó el comportamiento de la actividad catalítica de la enzima endiferentes pHs dándonos como resultado que a pH de 5, 7.5 y 9 la enzima está en condiciones óptimas de interacción con el sustrato, también se evaluó en diferentes temperaturas, donde obtuvimos que la temperatura optima de reacción es a 37 ºC y que superior a esta la enzima podría sufrir una desnaturalización y finalmente a diferente concentraciones, donde se evaluó la dependencia de la concentración dela enzima respecto a la reacción, llegando a la conclusión que son directamente proporcióneles.

Palabras Claves: Actividad enzimática, Lugol, complejo.

Análisis de Resultados y Cuestionario


1. Con los datos de la tabla del punto 1.8 realice una gráfica de “%REACCION VS pH” y explique cómo el pH afecta la actividad catalítica de la enzima y cuál es el rango de pH óptimo para la amilasaTabla 1.8 datos del % int y %rex según pH.
Tubo
pH
Solución de saliva 25% (mL)
Lugol (gotas)
%INT
%REX
1
3.0
1
3
95
5
2
4.0
1
3
60
40
3
5.0
1
3
0
100
4
7.5
1
3
0
100
5
9.0
1
3
0
100
6
10
1
3
40
60
7
11
1
3
90
10
8
7.5
-
3
100
0
En esta tabla se registran el porcentaje de intensidad de coloración (%int) y % reacción (% rex), locual nos indica las condiciones óptimas en las que el pH del medio de reacción debe de estar para que la enzima tenga una mayor actividad y así suceda con mayor eficiencia la reacción, estos porcentajes se realizan de acuerdo al cambio de coloración que presenta la reacción ya que es claro que cuando se visualiza el producto coloreado es porque la enzima no existe, o está en cantidad insuficiente,o está inactivada en este caso por la variación de pHs.
Gráfica Nº 1 pH vs Rex

En la gráfica se puede observar que para pH entre 5, 7.5 y 9 la enzima tiene su mayor actividad puesto que el sitio activo necesita una cantidad de hidrógenos necesaria para tener una carga ideal para realizar de manera correcta su función de catalizador frente a la reacción de hidrolisis.


2. ¿cuál será lafuncionalidad del tubo No 8 durante la evaluación de la actividad catalítica de la enzima, es un control positivo o negativo de la reacción de la hidrólisis de la amilosa?

Es un control negativo de la reacción de hidrólisis de la amilosa ya que al estar en presencia de yodo se presentara un color azul oscuro lo que indica que se formó un complejo el cual se ve afectado por el efecto de latemperatura es decir que al calentar la disolución se separan los iones yoduro de la enzima perdiendo el color dando un aspecto blanco transparente, cuando esto ocurre la reacción de hidrólisis de la amilasa disminuye al igual que el color del tubo caso contrario ocurre cuando se enfría.

3. ¿Cuál es la función del NaCl 0.9% durante la actividad catalítica de la amilasa salival?

En recientesdescubrimientos de actividad enzimática se dieron a conocer que la α -amilasa contiene en los restos de aminoácidos de su sitio activo cloro (--Cl), y por ello, al agregar NaCl, los aniones cloruro se unen al sitio activo aumentando la actividad enzimática. Es decir, el cloro actúa como cofactor de la enzima.


4. ¿Explique a qué se debe la formación del color azul o marrón en algunos de los tubos,consulte las estructuras de los complejos coloreados?

La reacción del Lugol es un método que se usa para identificar polisacáridos. 
El almidón en contacto con el reactivo de Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) toma un color azul-violeta característico. Esa coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molécula de almidón. Por lo tanto,...