analisi microbiologic

ANÀLISIS MICROBIOLÒGIQUES DE SUPERFÍCIES I AIRE

L’ objectiu d’aquesta practica es observar, aprendre i realitzar la detecció de microorganismes en superfícies i aire mitjançant varies mètodes amb diferents de medis de cultiu.

INTRODUCCIÓ TEORICA:

Els medis de cultius:

ROSA DE BENGALA: es un medi de color rosaci i pH neutre recomanat per a l’aïllament selectiu de fongs i llevats. Lapresencia de Rosa de Bengala inhibeix el creixement bacterià i restringeix la mida dels fongs, evitant el solapament de colònies de lent creixement amb les que creixen més ràpidament.

VRBG AGAR: es un medi selectiu utilitzat en la identificació presumptiva i enumeració d’enterobacteris en superfícies. Els microorganismes que fermenten la glucosa acidifiquen el medi amb el consegüent canvi del’indicador (vermell neutre). Els microorganismes Gram-positius estan inhibits.

SABOURAUD: es un medi recomanat per al recompte i investigació de fongs en mostres liquides i en superfícies. També es recomanat per l’aïllament de llevats i dermatòfits a partir de mostres contaminades.

SLANETZ BARTLEY AGAR: es un medi selectiu utilitzat pel recompte de enterococs en aigua potable (aigua, begudes),aigües residuals i diversos productes biològics de origen animal.


MATERIALS:

Bunsen -Plaques amb medis de cultiu:
Nansa de Digralski -PCA AGAR
Tub estèril - Mc Conkey
Ampolles de Ringer de 100 mL - Sabouraud
Borses esterils de primer us -Manitol
Hisop - Laminocultiu :
Pipeta estèril de 10 mL - Slanetz Bartley Agar
Etanol - VRGB Agar
Paper plata -Recipient demostra
Full de quadern - Monedes(objecte)
Plaques de RODAC: Rosa de Bengala i VRBG Agar


EXPERIMENTAL:

Per realitzar els anàlisis microbiològiques de superfícies i aire consta de 2 parts:
a) Per l’anàlisi de superfícies, es fa 4 mètodes:
-Mètode de l’hisop
-Mètode de l‘“enjuague”
-Mètode mitjançant les plaques RODAC
-Mètode de la llengüeta
b) I per l’anàlisi de l’aire, es fa unúnic mètode.

1. Prèviament abans de començar, faig una neteja del meu lloc de treball i munto per a treballar en condicions estèrils (un pam del Bunsen).
2. Una vegada que tinc tots els materials en la zona estèrils; retolo les plaques de petri principalment amb el medi cultiu que estic utilitzant, amb el mètode que estic fent i a la temperatura que es troba.

Per tant, faig els 4 mètodespels anàlisis de superfícies:

a) Mètode de l’hisop:

Utilitzo una fulla neta de quadern i faig una plantilla de 10 cm x 10 cm i curt, de manera que la part central sigui de 100 cm2.
Un cop ja retallada la plantilla de 10 x 10 cm, es folra amb paper plata els contorns.
Agafo una flascó amb Ringer ja havia preparat anteriorment i amb la ajuda de una pipeta estèril de 10 ml, agafo uns 10 mL deRinger i poso dins de un tub estèril.
Mullo l’hisop amb Ringer del tub estèril i pas l’hisop per la superfície de la taula del laboratori per la part tallada de la plantilla sense tocar els contorns que estan coberts amb paper plata.
Aquest pas l’hisop, faig en un lloc que no estigui en zona estèril i faig aquest desplaçament de l’hisop amb un moviment de 4 direccions (de dalt a baix, esquerra adreta, baix a dalt i dreta a esquerra)
Un cop acabat de passar-ho per la superfície, introdueixo l’hisop dins del tub estèril amb Ringer i agito donant-li petits cops.
Després d’agitar, amb una pipeta de 1mL, inoculo 0,1 mL del tub que conte la dissolució en les plaques de PCA AGAR i Mc Conkey i faig sembra per extensió amb la nansa Digralski prèviament esterilitzat abans i després del seu us.I per acabar amb aquest mètode, col·loco les plaques dins de la estufa a 37ºC per la seva incubació.

b) Mètode de l‘“enjuague”

Per aquest mètode es necessita 3 flascó amb 100 mL de Ringer cadascun.

1. Per les mans:
Buido un flascó amb 100 mL de Ringer en una borsa plàstica de primer ús.
Introdueixo les mans i faig el moviment com si m’estigués rentant les mans.
Un cop ja retirades...